果糖-6-磷酸盐磷酸酮酶（F6PPK）测定双歧杆菌

试剂

（1）0.05mol/L磷酸盐缓冲液pH6.5+500mg/L半胱氨酸-HCl。

（2）6mg/mLNaF+10mg/mL碘乙酸钠或钾

（3）果糖-6-磷酸盐（钠盐，70%-98%纯度）80mg/mL水溶液。

（4）盐酸羟胺(Hydroxy Lamine-HCl) 139mg/mL水溶液，使用时以NaOH中和至pH6.5。

（5）15g/100mL 三氯乙酸(TCA) 水溶液。

（6）4mol/L HCl。

（7）0.5 g/100mL FeCl3·6H2O溶于0.1mol/L HCl中。

1、挑取BBL琼脂上纯培养的双歧杆菌接种到TPY液体培养基, 绝对厌氧，36±1℃ 培养72h±3h。从10mL TPY培养液于3000r／min离心5min，弃上清液，细胞用上述试剂（1）洗涤2次，然后悬浮于1.0mL试剂（1）中。将盛有细胞悬液的容器置于一冰浴内，用超声波处理20min，以破碎细胞。然后在超声波处理物中加入试剂（2）和试剂（3）各0.25mL，置于37℃保温30 min。保温后在溶液中入1.5mL试剂（4），置室温5 min。加入试剂（5）和试剂（6）各1mL，置室温5 min。然后加入1mL试剂（7）观察溶液颜色。

2、结果判定：经以上程序测定如显红褐色或红紫色，则果糖-6-磷酸盐磷酸酮酶为阳性，否则为阴性。

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