菌落总数测定平板接种与培养

录入时间:2014-9-22 11:47:41 来源：海博生物

1.根据食品卫生标准要求和对样品污染情况的估计，选择2~3个稀释度。加入样品时要注意外来的污染。

2.培养基倾注的温度与厚度是实验正确与否的关键。（倾注的温度：一般45℃左右，温度过高会造成已受损伤的菌细胞死亡。厚度：直径9cm的平皿一般要求15～20mL培养基，若培养基太薄，在培养过程中可能因水分蒸发而影响细菌的生长）。

3.为防止细菌增殖及平板底部产生片状菌落，在加入样液后，应在20min内倾注培养基。检样与培养基混匀时，可先向一个方向旋转，然后再向相反方向旋转。旋转中应防止混合物溅到皿边的上方。

4.培养基凝固后，应尽快将平皿翻转培养，保持琼脂表面干燥，避免菌落蔓延生长，影响计数。

5.为控制污染，在实验过程中，应在工作台上打开一块琼脂平板，其暴露时间应与检样从制备、稀释到加入平皿时所暴露的最长时间相当，然后与检样一同培养，以了解检样在操作过程中有无受到来自外界的污染。

6.培养温度:

每种不同样品中的细菌都有一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及生理条件可能得出不同的结果，因而应根据检测标准的要求选择适当的培养温度和培养时间。

食品：36±１℃， 48±2h。

饮用水：36±１℃， 48h。

水产品：30±１℃， 72±3h。 (36℃培养和30℃培养结果差别较大，同样水产品48h结果和72h也有差别。)

7.对照试验：

检样的稀释液中往往带有食品颗粒，在这种情况下，为避免与细菌菌落混淆，可作同一稀释度检样对照，不经培养，置4℃环境放置，在计数时用于对照。

可选用TTC平板计数琼脂做培养基。一般加入量0.5%～1.0%浓度的TTC，100mL培养基中加入1mL。