微生物消毒灭菌法

 选用和设计培养基的原则、方法
及制备过程：
原则：目的明确 、营养协调、经济节约
      物理化学条件适宜
方法：生态模拟、查阅文献
      精心设计、试验比较 
步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、
      加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查 
培养基种类：
一、按成分的不同分
        天然培养基、合成培养基、半合成培养基
二、按培养基的物理状态分
        固体培养基、液体培养基、半固体培养基
三、按培养基用途
        基础培养基、选择培养基
        加富培养基、鉴别培养基
消毒与灭菌
消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体
灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。
   
方法：
一、物理的方法：加热、过滤、辐射
二、化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。 
加热法：
干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。
1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。
2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。
3、注意事项：
   1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；
   2）温度控制在<180°；
   3）物品不能太挤；
   4）温度降至70°时才开箱门。 
湿热法 ：
原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。
  
高压蒸汽灭菌法：
1、设备：高压灭菌锅
2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。
3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。
4、注意事项：
   1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时方可打开。 
常压蒸汽灭菌：
         对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。
  煮沸灭菌法：
            适用注射器和解剖器皿，时间10－15min，
   超高温杀菌  
         135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品。
      优点 ：保持食品价值和营养成分。
过滤除菌：
  原理：介质在有压力时阻隔微生物。
  适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。
  设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。
  优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。需  大量无菌空气以及净化工作台。              
  注意事项：1、压力适当；
            2、无菌条件下进行；
            3、防止渗透现象。 
辐射灭菌：
  原理：紫外线波长在200－300nm，具有杀菌作用，以265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。
  缺点：穿透力不大。距照射物<1.2m为宜。
  应用：无菌室，医院。
  注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用。
  射线灭菌：r射线，穿透力强，适用于堆积物品的灭菌。 
化学药品灭菌：
 原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。
 杀菌剂如重金属离子；
 抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。
 注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以及微生物所处的环境有关。
 常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸
 福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等 
   

 

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