肉毒梭菌毒素检测

检样经均质处理后，及时接种培养，进行增菌、产毒，同时进行毒素检测试验。

肉毒毒素检测 肉毒毒素的毒性极强，所以处理所有被怀疑含该毒素的材料时必须谨慎。

     标本的采集、运输及保存

食品标本：可疑食品采集后应尽快送检，密封食品，直至检验开始以前不要启封，非密封食品应采集于灭菌容器中，若需要远运，标本应装入严密的容器，置于冰壶中冷藏。

体液或组织标本：发生肉毒中毒时，若能直接从患者血清中检出肉毒毒素，是最可靠的实验室诊断。采血量应足够中和试验用。血清、呕吐物、粪便及尸体标本均须装入灭菌容器中，尽快送检。水产动物的脏器标本应以消化道为主。

土壤：以灭菌工具由地表面下10~20cm处取土，装入灭菌容器。

    标本的处理

为了尽量保持肉毒毒素的稳定，稀释液应用明胶磷酸盐缓冲液。

血清分离后可直接供作肉毒毒素检测试验，无需另加处理。

液状检样可直接离心，固体或半流动检样须加适量（例如等量、倍量或 5倍量、10 倍量）明胶磷酸盐缓冲液浸泡、研碎，然后离心，取上清液进行检测。 另取一部分上清液，调 pH6.2，每 9 份加 10%胰酶（活力 1：250）水溶液 1份，混匀，不断轻轻搅动，37℃作用 60 min，进行检测。（E 型及非蛋白分解的B、F型肉毒梭菌产生的前体毒素，做动物试验时，须激活，使之变为活化毒素。） 

肉毒毒素方法介绍

小鼠生物检测：是目前唯一被公认的确认肉毒毒素的方法，是检测肉毒毒素的金标准。

基于免疫化学的检测方法（A、B、E、F型肉素的检测）：

 ELISA法：用来检测肉毒毒素已经有20多年了，但是常规ELISA的检测灵敏度远远低于小鼠生物检测。目前试用的有amp-ELISA、DIG- ELISA，提高了灵敏度，此方法已被用于检测食物样品，检测时间大约需要6h。但是存在型间交叉的问题，阳性样品仍需小鼠生物检测法进行确认。

 PCR法：目前还没有用此方法检测样品，原因是其灵敏度非常高，容易受样品基质的干扰得至假阳性结果。检测纯水中的毒素只需3h。

 目前已发表或试用的其它方法：免疫电泳法、放射免疫法、琼脂凝胶扩散法等。但这些方法的敏感性都不如小鼠生物检测法高

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