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抗生素微生物检定法—— 灭菌缓冲液及菌悬液的制备



录入时间:2008-10-20 13:28:14 来源:青岛海博 

   
一、 灭菌缓冲液                                                      
    磷酸盐缓冲液(pH6.0) 取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g,加水使成1000ml,滤过,
在115℃灭菌30分钟。
    磷酸盐缓冲液(pH7.8) 取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g,加水使成1000ml,
滤过,在115℃灭菌30分钟。     
    磷酸盐缓冲液(pH10.5) 取磷酸氢二钾35g,加10mol/L氢氧化钾溶液2ml,加水使成
1000ml,滤过,在115℃灭菌30分钟。        
二、菌悬液的制备                                                    
    枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)悬液  取枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]
的营养琼脂斜面培养物,接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中,在35~37℃培养7日,
用革兰氏染色法涂片镜检,应有芽孢85%以上。用灭菌水将芽孢洗下,在65℃加热30分
钟,备用。
    短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液 取短小芽孢杆菌[CMCC(B)63202]的
营养琼脂斜面培养物,照上述方法制备。                                        
    金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)悬液  取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)
26003]的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,在35~37℃培养20~22小时。
临用时,用灭菌水或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。
    藤黄微球菌(Micrococcus luteus)悬液  取藤黄微球菌[CMCC(B)28001]的营
养琼脂斜面培养物,接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中,在26~27℃培养24小时,
或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。
    大肠杆菌(Escherichia coli)悬液  取大肠杆菌[CMCC(B)44103]的营养琼脂
斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,在35~37℃培养20~22小时。临用时,用灭菌水
将菌苔洗下,备用。                                                              
    啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)悬液  取啤酒酵母菌(9763)的V号培
养基琼脂斜面培养物,接种于Ⅳ号培养基琼脂斜面上。在32~35℃培养24小时,用灭菌
水将菌苔洗下置含有灭菌玻璃珠的试管中,振摇均匀,备用。
    
 三、标准品溶液的制备  标准品的使用和保存,应照标准品说明书的规定。临用时照表
1的规定进行稀释。                                          
 四、供试品溶液的制备  精密称(或量)取供试品适量,用各药品项下规定的溶剂溶解
后,再按估计效价或标示量照表1的规定稀释至与标准品相当的浓度。        
    
五、双碟的制备  取直径约90mm、高16~17mm的平底双碟,分别注入加热融化的培养基
(照表 1)20ml,使在碟底内均匀摊布,放置水平台上使凝固,作为底层。另取培养基
适量加热融化后,放冷至48~50℃(芽孢可至60℃),加入规定的试验菌悬液适量(能
得清晰的抑菌圈为度。二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18~22mm,三
剂量法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在15~18mm),摇匀,在每1双碟中分别
加入5ml,使在底层上均匀摊布,作为菌层。放置水平台上冷却后,在每1双碟中以等距
离均匀安置不锈钢小管(内径6.0±0.1mm,高10.0±0.1mm,外径7.8±0.1mm)4个(二
剂量法)或6个(三剂量法),用陶瓦圆盖覆盖备用。     

 

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