抗生素微生物检定法—— 灭菌缓冲液及菌悬液的制备

   
一、 灭菌缓冲液                                                      
    磷酸盐缓冲液(pH6.0) 取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g，加水使成1000ml，滤过，
在115℃灭菌30分钟。
    磷酸盐缓冲液(pH7.8) 取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使成1000ml，
滤过，在115℃灭菌30分钟。     
    磷酸盐缓冲液(pH10.5) 取磷酸氢二钾35g，加10mol/L氢氧化钾溶液2ml，加水使成
1000ml，滤过，在115℃灭菌30分钟。        
二、菌悬液的制备                                                    
    枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液  取枯草芽孢杆菌［CMCC（B） 63501］
的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日,
用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分
钟，备用。
    短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）悬液　取短小芽孢杆菌［CMCC（B）63202］的
营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。                                        
    金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液  取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）
26003］的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
    藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液  取藤黄微球菌［CMCC（B）28001］的营
养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26～27℃培养24小时，
或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
    大肠杆菌（Escherichia coli）悬液  取大肠杆菌［CMCC（B）44103］的营养琼脂
斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。临用时，用灭菌水
将菌苔洗下，备用。                                                              
    啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液  取啤酒酵母菌（9763）的Ｖ号培
养基琼脂斜面培养物，接种于Ⅳ号培养基琼脂斜面上。在32～35℃培养24小时，用灭菌
水将菌苔洗下置含有灭菌玻璃珠的试管中，振摇均匀，备用。
    
 三、标准品溶液的制备  标准品的使用和保存，应照标准品说明书的规定。临用时照表
1的规定进行稀释。                                          
 四、供试品溶液的制备  精密称（或量）取供试品适量，用各药品项下规定的溶剂溶解
后，再按估计效价或标示量照表1的规定稀释至与标准品相当的浓度。        
    
五、双碟的制备  取直径约90mm、高16～17mm的平底双碟，分别注入加热融化的培养基
（照表 1）20ml，使在碟底内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。另取培养基
适量加热融化后，放冷至48～50℃（芽孢可至60℃），加入规定的试验菌悬液适量（能
得清晰的抑菌圈为度。二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18～22mm，三
剂量法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在15～18mm），摇匀,在每1双碟中分别
加入5ml，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置水平台上冷却后，在每1双碟中以等距
离均匀安置不锈钢小管（内径6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，外径7.8±0.1mm）4个（二
剂量法）或6个（三剂量法），用陶瓦圆盖覆盖备用。     

 

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