将待检样品选取适宜的2~3个连续稀释度, 每个稀释度接种2张测试片。将PetrifilmTM大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用吸管吸取1mL样液垂直滴加在测试片的中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜直接落下，把压板（平面底朝下）放置在上层膜中央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。
将测试片的透明面朝上置于培养箱内，堆叠片数不超过20片，36℃± 1℃培养24h±2h。
合理稀释度的选择，每稀释度接种2张测试片；
避免气泡产生；
培养基未凝固时勿挪动。
培养24h ±2h后应立即计数，可目测、用标准菌落计数器、显微镜、或 PetrifilmTM自动判读仪来计数。红色有气泡的菌落确认为大肠菌群数。培养圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不作计数。当培养区域出现大量气泡，大量不明显小菌落或培养区呈暗红色三种情况，表明大肠菌群的浓度较高，需要进一步稀释样品来获得准确的读数。
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