国家标准β型溶血性链球菌检验流程（GB4789.11-2014）

操作步骤

6.1 样品处理及增菌

按无菌操作称取检样 按无菌操作称取检样 按无菌操作称取检样 按无菌操作称取检样 按无菌操作称取检样 25 g （mL ）加 入盛有225 mLTSB的均质袋中，用拍击式器1 min～ 2 min ；或加入盛有  225 mL  TSB 的均质杯中，以 8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min。若样品为 液态，振荡均匀即可。  36 ℃ ±1 ℃培养 18 h ～24 h 。

6.2 分离

将增菌液划线接种于哥伦比亚CNACNACNA血琼脂平板， 血琼脂平板，36 ℃±1 ℃厌氧培养18 h ～24 h ，观察菌落形态。

溶血性链球菌在哥伦比亚 CNACNACNA血琼脂平板上的 典型菌落 形态为 直径 约 2 mm ～3 mm ，灰白色、半透

明光滑表面突起圆形边缘整齐，并产生 β 型溶血。

6.3 鉴定

6.3.1 分纯培养

挑取 5个（ 如小于 5个则全选） 可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和 TSB 增菌液， 36 ℃ ±1 ℃ 培养 18 h ～24 h 。

6.3.2 革兰氏染色镜检

挑取可疑菌落染色镜检。 β 型溶血性链球菌球形或卵圆为革兰氏染色阳性， 球形或卵圆常排列成短链状

6.3.3 触酶试验

挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量 滴加适量 3% 过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β 型溶血性 型溶血性 链球菌触酶为阴性。 6.3.4 链激酶试验（选做项目）

吸取草酸钾血浆0.2 mL于 0.8 mL灭菌生理盐水中混匀，再加入经 36 ℃±1 ℃培养 18 h ～24 h 的可 疑菌的TSB培养液0.5 mL及 0.25% 氯化钙溶液0.25 mL，振荡摇匀置于36 ℃±1 ℃水浴中10 min，血 浆混合物自行凝固（程度至试管倒置，内容不流动）。继续 36 ℃±1 ℃培养24 h ，重新完全溶解为阳性 ，不阴

6.3.5 其他检验

使用生化鉴定试剂盒或卡对可疑菌落进行。

7 结果与报告

综合以上试验结果，报告每 25 g （mL ）检样中出或未溶血性链球

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