革兰氏阳性；
小的、类似球形杆菌，0.4~0.5×0.5~2µm，在有些培养基中稍弯，两端钝圆，单个、成短链、细胞彼此连成V形，或成群的细胞沿长轴方向平行排列，在较老的或生长不良的培养物中，可能形成丝状；
20-25℃以4根周生鞭毛运动，在37℃只有较少的鞭毛或1根鞭毛；周毛易脱落。
无芽孢、兼性厌氧、一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜，在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性。
兼性厌氧；
该菌营养要求不高，在20--35℃培养有动力，穿刺培养2－5天可见伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。
最适培养温度为30--37℃。
pH范围pH4.4-pH9.6。
在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。
在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。
在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSA-YE)琼脂上，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
触酶阳性，氧化酶阴性。
能发酵多种糖类，产酸不产气。
发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖；
不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。
不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解，吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性；
VP、甲基红试验和精氨酸水解阳性。
根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单增利斯菌分成13个血清型，分别是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和 “7”。
致病菌株的血清型一般有8个型：1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。
该菌对理化因素抵抗力较强，是无芽胞细菌中抵抗力最强的细菌；
对碱和盐抵抗力强，60-70℃经5-20min可杀死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min 可杀死此菌；
湿热灭菌（121℃，至少15min）和干热灭菌（160-170℃，至少1hr）可杀灭该菌，对紫外线和γ射线敏感；
该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素（已产生抗性）、氨基糖苷类、氯霉素均敏感。
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