微生物菌落的观察
一、实验目的和内容
目的：识别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌四大类微生物的菌落特征。
内容：
1．观察已知菌的菌落的形态、大小、色泽、透明度、致密度和边缘等特征。
2．根据菌落的形态特征判断未知菌的类别。
二、实验材料和用具
大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粘红酵母(Rhodotorula gracitis)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、细黄链霉菌(Streptomyces microflavus，又称“5406”抗生菌)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus )、黑曲霉(Aspergillus niger )、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)、球孢白伍菌(Beauveria bassiana)等细菌的斜面菌种。
牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基、高氏1号培养基、无菌水。
接种环、接种针、酒精灯、无菌培养皿多套、电热恒温箱。
三、操作步骤
(一)制备已知菌的单菌落
1．制备平板 将已融化的无菌培养基待冷却至50℃左右，分别制备牛肉膏蛋白胨培养基平板、马铃薯蔗糖培养基平板和高氏1号培养基平板各一皿。
2．制备菌悬液或孢子悬液 在培养好的斜面菌种管内加入5mL无菌水，制成菌悬液后备用。
3．制备单菌落 通过平板划线法获得细菌、酵母菌和放线菌的单菌落。用三点接种法获得霉菌的单菌落。细菌于37℃恒温培养24～48h，酵母菌于28℃培养2～3d，霉菌和放线菌置28℃培养5～7d，待长成菌落后，仔细观察四大类微生物菌落的形态特征，并将观察结果记录于表4-1中。
(二)制备未知菌落
l．倒平板
2．接种 可用弹土法接种，其要点为：采集校园土壤，待风干磨碎后，可将细土撒在无菌的硬板纸表面，先弹去纸面浮土，然后打开皿盖，便含土的纸面对着平板培养基的表面，用手指在硬板纸背面轻轻一弹即可接种上各种微生物。
3．培养 将牛肉膏蛋白胨培养基平板倒置于37℃培养箱中恒温培养2～3d，将马铃薯蔗糖培养基倒置于28℃培养箱中恒温培养3～5d，即可获得未知菌的单菌落。
4．编号 从培养好的未知平板中，挑选8个不同的单菌落，逐个编号，根据菌落识别要点区分未知菌落类群，并将判断结果填入表4～2中。
(三)直接观察菌落
直接用实验3中的“土壤稀释分离”获得的单菌落进行观察识别，并将结果填入表4-2中。
四、注意事项
观察菌落特点时，要选择分离得很开的单个较大菌落；已知菌落和未知菌落要编好号，请勿随意移动开盖，以免搞混菌号。
五、实验报告
1．已知菌落的形态特征记录于表4～1中。
2．将未知菌落的辨别结果记录于表4～2中。
七、问题和思考
1．试比较细菌、放线菌、酵母菌和霉菌菌落形态的差异?
2．设计一个实验，检测实验室空气环境中的微生物类别?
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