空肠弯曲菌检验操作步骤 GB4789.9-2014

5.1 样品处理

5.1.1 一般样品

取25g（mL)样品（水果、蔬菜、水产品为50g）加入盛有225mL Bolton肉汤的有滤网的均质袋中（若为无滤网均质袋可使用无菌纱布过滤），用拍击式均质器均质1min～2min，经滤网或无菌纱布过滤，将滤过液进行培养。

5.1.2 整禽等样品

用200mL0.1%的蛋白胨水中充分冲洗样品的内外部，并振荡2min～3min，经无菌纱布过滤至250mL离心管中，16000g离心15 min后弃去上清，用10 mL 0.1%蛋白胨水悬浮沉淀，吸取3 mL于100 mLBolton肉汤中进行培养。

5.1.3 贝类

取至少12个带壳样品，除去外壳后将所有内容物放到均质袋中，用拍击式均质器均质1min～2min，取25g样品至225 mLBolton肉汤中（1:10稀释），充分震荡后再转移25mL于225 mLBolton肉汤中（1:100稀释），将1:10和1:100稀释的Bolton肉汤同时进行培养。

5.1.4 蛋黄液或蛋浆

取25 g（mL)样品于125mLBolton肉汤中并混匀（1:6稀释），再转移25mL于100mLBolton肉汤中并混匀（1:30稀释），同时将1:6和1:30稀释的Bolton肉汤进行培养。

5.1.5 鲜乳、冰淇淋、奶酪等

若为液体乳制品取50g；若为固体乳制品取50g加入盛有50mL0.1%蛋白胨水的有滤网均质袋中，用拍击式均质器均质15s～30 s，保留过滤液。必要时调整pH值至7.5±0.2，将液体乳制品或滤过液以20000g 离心30 min后弃去上清，用10 mL Bolton肉汤悬浮沉淀（尽量避免带入油层），再转移至90 mLBolton肉汤进行培养。

5.1.6 需表面涂拭检测的样品

无菌棉签擦拭检测样品的表面（面积至少100 cm2以上），将棉签头剪落到100 mLBolton肉汤中进行培养。

5.1.7 水样

将4 L 的水（对于氯处理的水，在过滤前每升水中加入5 mL1mol/L硫代硫酸钠溶液）经0.45 μm滤膜过滤，把滤膜浸没在100 mL Bolton肉汤中进行培养。

5.2 预增菌与增菌

在微需氧条件下，36 ℃±1 ℃培养4 h，如条件允许配以100 r/min的速度进行振荡。必要时测定增菌液的pH值并调整至7.4±0.2，42 ℃±1 ℃继续培养24 h～48 h。

5.3 分离

将24 h增菌液、48 h增菌液及对应的1:50稀释液分别划线接种于Skirrow血琼脂与mCCDA琼脂平板上，微需氧条件下42 ℃±1 ℃培养24 h～48 h。另外可选择使用空肠弯曲菌显色平板作为补充。

观察24 h培养与48 h培养的琼脂平板上的菌落形态，mCCDA琼脂平板上的可疑菌落通常为淡灰色，有金属光泽、潮湿、扁平，呈扩散生长的倾向。Skirrow血琼脂平板上的第一型可疑菌落为灰色、扁平、湿润有光泽，呈沿接种线向外扩散的倾向；第二型可疑菌落常呈分散凸起的单个菌落，边缘整齐、发亮。空肠弯曲菌显色培养基上的可疑菌落按照说明进行判定。

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