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细菌回复突变试验仪器和试剂(一)-GB 15193.4—2014


录入时间:2015-1-28 8:50:27 来源:食品安全国家标准

4、仪器和试剂
4.1  仪器
    实验室常用设备、低温高速离心机、低温冰箱(-80℃)或液氮罐、生物安全柜、恒温培养箱、恒温水
浴、灭菌设备、匀浆器等。
4.2试剂

4.2.1  营养肉汤培养基
       牛肉膏        2.5 g
       胰蛋白胨      5.0 g
       氯化钠        2.5 g
       磷酸氢二钾    1.3 g
    加蒸馏水至500 mL,加热溶解,调pH至7.4,分装后0.103 MPa灭菌20 min,4℃保存备用,保存
期不超过半年。

4.2.2 营养肉汤琼脂培养基
    琼脂粉    1.5 g
    加营养肉汤培养基至100 mL,加热融化后调节pH为7.4,0.103 MPa灭菌20 min。

4.2.3 底层培养基
4.2.3.1  配制方法
    在400mL灭菌的1.5%琼脂培养基(100℃)中依次加入磷酸盐贮备液8 mL,40%葡萄糖溶液
20mL,充分混匀,冷却至80℃左右时按每平皿25 mL(相对于90 mm平皿)制备平板,冷凝固化后倒
置于37℃培养箱中24 h,备用。

4.2.3.2  磷酸盐贮备液(Vogel—Bonner minimal medium E,50倍)
    磷酸氢钠铵       17.5 g
    柠檬酸           10.0 g
    磷酸氢二钾       50.0 g
    硫酸镁           1.O g
    加蒸馏水至100 mL溶解,0.103 MPa灭菌20 min。
    注:待其他试剂完全溶解后冉将硫酸镁缓慢放人其中继续溶解,否则容易析出沉淀。
4.2.3.2  40%葡萄糖溶液
    葡萄糖40.0 g加蒸馏水至100 mI.,O.055 MPa灭菌20 min。
4.2.3.4  1.5%琼脂培养基
    琼脂粉6.0加入400 mL锥形瓶,加蒸馏水至400 mL,融化后,0.103 MPa灭菌20 min。
4.2.4 顶层培养基
    加热融化顶层琼脂,每100 mL顶层琼脂中加10 mL组氨酸生物素溶液(0.5 mmol/L)。混匀,分
装在4个烧瓶中,0.103 MPa灭菌20 min。用时融化分装小试管,每管2 mL,45℃水浴中保温。顶层
琼脂和组氨酸生物素溶液(0.5mmol/L)配制如下。
4.2.4.1 顶层琼脂
    琼脂粉3.0 g,氯化钠2.5g加蒸馏水至500 mI。,0.103 MPa灭菌20 min。

4.2.4.2 组氨酸一生物素溶液(0.5mmol/L)(诱变试验用)
    D-生物素(相对分子质量244)30.5 mg和L-组氨酸(相对分子质量155)19.4 mg加蒸馏水至
250 mL,0.103 MPa灭菌20 min。
4.2.5特殊试剂及培养基
4.2.5.1 0.8%氨苄青霉素溶液(鉴定菌株用,无菌配制)
    氨苄青霉素40 mg用氢氧化钠溶液(0.02 mo1/L)稀释至5 mL,保存4℃冰箱备用。
4.2.5.2 0.1%结晶紫溶液(鉴定菌株用)
    100 mg结晶紫,溶于无菌水至100 mL。
4.2.5.3 L-组氨酸溶液和D-生物素溶液(0.5mmol/L)(鉴定菌株用)
    L-组氨酸0.4043 g和D-生物素12.2 mg分别溶于蒸馏水至100 mL,0.103 MPa灭菌20 min,保存
于4℃冰箱备用。
4.2.5.4 0.8%四环素溶液(用于四环素抗性试验和氨苄青霉素四环素平板)
    40 mg四环素用盐酸缓冲液(0.02 mol/L)稀释至5 mL,保存于4℃冰箱。
4.2.5.5 氨苄青霉素平板(用作TA97、TA98、TAl00菌株的主平板)和氨苄青霉素四环素平板(用作
TAl02菌株的主平板)
    每1000 mL由以下成分组成:
    底层培养基    980 mL
    组氨酸水溶液(0.4043 g/100 mL)    10 mL
    生物素(0.5mmol/L)    6 mL
    0.8%氨苄青霉素溶液    3.15 mL
    0.8%四环素溶液    0.25 mL
    四环素仅在使用对四环素有抗性的TAl02时加入。各成分均已分别灭菌或无菌制备。
4.2.5.6组氨酸-生物素平板(组氨酸需要试验用)
    每1000 mL中由以下成分组成:
    底层培养基    984 mL
    组氨酸水溶液(0.4043 g/100 mL)  10 mL
    生物素(0.5 mmol/L)  6 mL
    各成分均已分别灭菌。
4.2.5.7二甲亚砜(DMSO)
    光谱纯,无菌。

 

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