试验方法-细菌回复突变试验

7  试验方法
7．1  总则
    常用的试验方法有平板掺入法、预培养平板掺人法和点试法等。
7．2平板掺入法
7．2．1  将主平板或冷冻保存的菌株培养物接种于营养肉汤培养基内，37℃振荡(100次／min)培养10 h或静置培养16 h，使活菌数不少于1×10⁹ ／mL～2×10⁹／mL。
7．2．2底层培养基平板，每个剂量加S9和不加S9均做3个平板。
7．2．3融化顶层培养基分装于无菌带帽小试管(试管数与平板数相同)，每管2 mL，在45℃水浴中保温。
7．2．4在保温的顶层培养基(试管)中依次加入测试菌株新鲜增菌液0.1 mL，混匀；试验组加受试物0.0.5mL～0．2 mL(一般加入

0.1mL，需活化时另加10％S9混合液0．5 mL)，再混匀，迅速倾人铺好底层培养基的平板上，转动平板使顶层培养基均匀分布在底

层培养基上，平放固化；37℃培养48 h观察结果，必要时延长至72 h观察结果。
7．2．5  阳性对照组加入同体积标准诱变剂；溶媒对照组只加入同体积的溶媒；未处理对照组只在培养基上加菌液；其他方法同

试验组。
7．3预培养平板掺入法
    预培养对于某些受试物可取得较好效果。因此可根据情况确定是否进行预培养。在加入顶层培养基前，先进行以下预培养步骤：
    a)  将受试物(需活化时另加10％S9混合液0．5 mL)和菌液，在37℃中培养20 min，或在30℃中培养30 min；
    b)再加入2 mL顶层琼脂；
    其他同7．2。
7．4  点试法
7．4．1  按7．2．1操作。
7．4．2按7．2．2操作。
7．4．3按7．2．3操作。
7．4．4  在水浴保温的顶层培养基中依次加入测试增菌液0.1 mL(需活化时另加10％S9混合液o．5 mL)，混匀，迅速倾入底层培养基上，转动平板，使顶层培养基在底层分布均匀。平放固化后取无菌滤纸片(直径约为6 mm)，小心放在已固化的顶层培养基的适当位置上，用移液器取适量受试物(如10μL)，点在纸片上，或将少量固体受试物结晶加到纸片或琼脂表面；37℃培养48 h观察结果。
7．4．5另作阳性对照组和溶媒对照组，分别在滤纸片上加人同体积标准诱变剂、溶媒，未处理对照组滤 纸片上不加物质，其他

步骤同上。

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