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试验方法-细菌回复突变试验


录入时间:2015-2-2 10:12:56 来源:食品安全国家标准

7  试验方法
7.1  总则
    常用的试验方法有平板掺入法、预培养平板掺人法和点试法等。
7.2平板掺入法
7.2.1  将主平板或冷冻保存的菌株培养物接种于营养肉汤培养基内,37℃振荡(100次/min)培养10 h或静置培养16 h,使活菌数不少于1×109 /mL~2×109/mL。
7.2.2底层培养基平板,每个剂量加S9和不加S9均做3个平板。
7.2.3融化顶层培养基分装于无菌带帽小试管(试管数与平板数相同),每管2 mL,在45℃水浴中保温。
7.2.4在保温的顶层培养基(试管)中依次加入测试菌株新鲜增菌液0.1 mL,混匀;试验组加受试物0.0.5mL~0.2 mL(一般加入

0.1mL,需活化时另加10%S9混合液0.5 mL),再混匀,迅速倾人铺好底层培养基的平板上,转动平板使顶层培养基均匀分布在底

层培养基上,平放固化;37℃培养48 h观察结果,必要时延长至72 h观察结果。
7.2.5  阳性对照组加入同体积标准诱变剂;溶媒对照组只加入同体积的溶媒;未处理对照组只在培养基上加菌液;其他方法同

试验组。
7.3预培养平板掺入法
    预培养对于某些受试物可取得较好效果。因此可根据情况确定是否进行预培养。在加入顶层培养基前,先进行以下预培养步骤:
    a)  将受试物(需活化时另加10%S9混合液0.5 mL)和菌液,在37℃中培养20 min,或在30℃中培养30 min;
    b)再加入2 mL顶层琼脂;
    其他同7.2。
7.4  点试法
7.4.1  按7.2.1操作。
7.4.2按7.2.2操作。
7.4.3按7.2.3操作。
7.4.4  在水浴保温的顶层培养基中依次加入测试增菌液0.1 mL(需活化时另加10%S9混合液o.5 mL),混匀,迅速倾入底层培养基上,转动平板,使顶层培养基在底层分布均匀。平放固化后取无菌滤纸片(直径约为6 mm),小心放在已固化的顶层培养基的适当位置上,用移液器取适量受试物(如10μL),点在纸片上,或将少量固体受试物结晶加到纸片或琼脂表面;37℃培养48 h观察结果。
7.4.5另作阳性对照组和溶媒对照组,分别在滤纸片上加人同体积标准诱变剂、溶媒,未处理对照组滤 纸片上不加物质,其他

步骤同上。

 

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