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疏水格滤膜(HGMF)MPN值计数法


录入时间:2015-3-2 9:27:33 来源:青岛海博生物

 

Sharpe和他的同事在20世纪70年代完善了疏水网格滤膜(HGMF)法,使用这种方法可用最小稀释度的样液估计出菌落形成单位cfus(或繁殖体)的数量(见SharpePetekin1988)。

美国加利福尼亚州圣迭戈QA生命科学公司是一个具有5cm×5cm过滤面积的正方形滤膜。滤膜上的过滤面积被黑色的疏水格线分割成1600个小方格。

在培养期间,微生物在方格中生长,并被方格的格线围住。培养后,对有细菌生长的方格进行计数(如果采用鉴定培养基,对显示适当的颜色反应的方格进行计数)。由于一个呈阳性的小格中不仅仅有一个菌落形成单位(cfu)或繁殖体[在本文中Sharpe指的是“生长单位”,而不是菌落形成单位(cfu],所以这并不是“菌落计数”。在HGFM法中,统计一个系适度有细菌生长的方格的数量就可以计算出MPN值。可用下列公式进行计算MNP值:                  Nlog

式中 N——方格中的总数(如在Iso-Grid®中,N=1600

   x——呈阳性方格的数量

1600Iso-Grid®滤膜检测样品接种物时,合理精确的计数范围是15000。这种方法需要配置的稀释度比运用平板或滤膜的常规菌落计数所用的稀释度更低。当滤膜的一半方格呈阳性时,精确度更高。

在美国(见FDA,1992;AOAC,1995)和加拿大,HFMF法在食品微生物分析中是一种认可的官方方法。

SharpePetekin1988)制定了用HGMF方法进行需氧嗜温菌和大肠菌,沙门氏菌以及李斯特菌等特定微生物技术的操做规程。

由于滤膜的方格是整齐排列的,这就可以应用自动电子技术设备对滤膜上呈阳性的方格进行计数。因为当一半方格呈阳性时,能达到最大的精度,如果人工计数这800个方格是很费劲的,很可能由于工作人员的疲劳造成计数的错误,因此使用自动技术设备不但能节约劳力,还能减少实验错误。

代替疏水方格滤膜进行单倍稀释的MPN值计数的一种方法是微量滴定板法。如果目标为生物在培养基中的生长可能造成颜色变化,培养后就可以使用微量滴定板自动进行检测,这个检测系统现已投入商业生产。例如将Qusnti-TrayColilert(美国缅因州IDEXX公司)结合使用进行总大肠菌群和大肠杆菌的MPN计数。

 

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