生物因素对细菌的影响

(一) 细菌对抗生素的敏感性测定 (药敏试验)

【材料】

金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌18~24 小时肉汤培养液、琼脂平板培养基、抗生素纸片(浸沾一定浓度的青、链、氯、庆大霉素后，37℃烘干备用)、尖头镊子。

【方法】

1． 取琼脂平板培养基 2 块，分别于其底部玻璃上注明金黄色葡萄球菌及痢疾杆菌，并用蜡笔将平皿底部划分四等分，分别注明青、链、氯、庆大霉素。

2． 将二菌菌液分别涂于上述二个培养基平板上。

3． 镊子经火焰灭菌，镊取各药物纸片，分别贴于涂有细菌的培养基平板表面相应位置上。

4． 置 37℃中孵育18~24 小时，观察纸片周围有无抑菌圈，并比较各抑菌圈的大小，判断二菌对抗生素的敏感度。

附：纸片法药敏试验纸片含药量和结果解释（NCCLS 1998 年）

NCCLS：美国临床实验室标准化委员会

(二) 噬菌体对细菌的作用—特异性裂解试验 (平板法)

【材料】

大肠杆菌及痢疾杆菌琼脂斜面培养物、琼脂平板培养基、痢疾杆菌噬菌体。

【方法】

1． 取琼脂平板一只并划分三等，分别标明 1、2、3。

2． 以接种环将痢疾杆菌分别密涂于 1、3 两处，2 处涂布大肠杆菌。

3． 用接种环沾取痢疾杆菌噬菌体加于 1、2 处的中央，另取l 接种环肉汤放于3 处中央。

4． 将此培养基平板置 37℃孵育12~24 小时，观察噬菌斑出现的位置加以分析。

附录：

一、单糖发酵管培养基制备：配制各种单糖成 20％浓度的水溶液，8 磅蒸汽压力下灭菌15 分钟。取pH7．6 的蛋白胨水1000 毫升，加入1．6％溴甲酚紫液1 毫升，混合后分装于内置一支玻璃小倒管的10×100 毫米试管，每管约3－4 毫升，15磅蒸汽压力下灭菌15 分钟。取出后各管贴上颜色标签或在棉塞上染以颜色。在细菌学中，通常红色代表葡萄糖、黄色代表乳糖、白色甘露醇、紫色麦牙糖等，最后以无菌操作加入相应的灭菌糖溶液至每管中，使最终浓度为l％。

二、IMViC试验所需培养基，试剂

（一）培养基

1． 蛋白胨水：将蛋白胨10 克、氯化钠5 克溶解于蒸馏水1000 毫升中，调整酸碱度至 pH7.6，15 磅蒸汽压下灭菌20 分种，若作吲哚试验者，宜采用多胨，因其中含色氨酸较多。

2． 葡萄糖蛋白胨水：溶解蛋白胨5 克，葡萄糖5 克、磷酸氢二钾5 克于蒸馏水 1000 毫升中，调整至pH7.2，滤纸过滤，分装后，经8 磅蒸汽灭菌15 分钟。

3． 枸橼酸盐斜面培养基：溶解磷酸二氢铵0.1 克、硫酸镁0.02 克、磷酸氢二钾 0.1 克、枸橼酸钠0.2 克、氯化钠0.5 克于蒸馏水100 毫升中，加入琼脂2克。加热溶化之。酸碱度调整至pH6．8，加入指示剂0.5%溴麝香草酚兰酒精溶液2 毫升。摇匀，脱脂棉过滤，分装，15 磅蒸汽压下灭菌20 分钟，趁热制成斜面。制就的枸橼酸盐培养基应呈绿色。

(二)试剂

1． 甲基红试剂：称取甲基红粉剂 0.1 克,溶于95％酒精300 毫升中，再以蒸馏水稀释至 500 毫升。

2． 对二甲基氨基苯甲醛(吲哚试剂)：对二甲基氨基苯甲醛5g 与戊醇或丁醇 75 毫升混合，置50～60℃水浴箱中过夜。次日取出，徐徐滴入浓盐酸25 毫升，滴加时随滴随摇。配后放暗处备用。

（三）其他生化反应用培养基

1． 醋酸铅培养基：加热融化2％肉汤琼脂200 毫升，加入硫代硫酸钠0.5克。混合后，15 磅蒸汽压下灭菌20 分钟。待冷至45℃，无菌操作加入经间歇灭菌的10％醋酸溶液1 毫升。分装、直立静置待凝。

2． 尿素固体培养基：取蛋白胨0.1 克、氯化钠0.5 克，磷酸二氢钾0.2克、琼脂2 克于蒸馏水100 毫升中，加热溶化。调正pH 至7.4，脱脂棉过滤。加入0.6％酚红0.2 毫升，混匀，8 磅蒸汽压下灭菌15 分钟。冷至60℃时，每100 毫升加入l0％无菌葡萄糖液l 毫升及20％尿素液1 毫升(尿素液应经蔡氏滤菌器过滤除菌)。混合，分装，每管装2~3 毫升，制成斜面。

(四)常用指示剂的变色范围。

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