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病毒动物接种法


录入时间:2015-3-3 10:10:49 来源:青岛海博生物

 病毒动物接种法

  实验动物在病毒学研究中有四方面用途:①分离鉴定病毒,如乙脑病毒;②连续传代通过,以减弱有毒株对人的致病力,如狂犬病病毒;③制备抗血清;④病毒致病机理的研究。

  常用的实验动物有小白鼠、地鼠、豚鼠、家兔、绵羊、鸡、猴等。在病毒学研究中,动物接种时为避免动物本身可能带有病毒,多采用实验室自己繁殖的动物。首先根据研究目的选择动物种类,对病毒致病机制的研究,则选择愈接近人类的高等动物(例如灵长类)研究结果愈有价值;其次要注意动物的年龄、性别和接种的途径等各种因素,一般年幼的动物比成年动物对病毒的敏感性高。至于接种的途径应根据病毒的嗜性决定,例如脑炎病毒以脑内注射最敏感。

(一)小白鼠尾静脉接种

【材料】

1. 动物:小白鼠

2. 病毒悬液

3. 碘酒、酒精、二甲苯、无菌0.25ml 注射器、4 号针头及小铝匣

【方法】

1. 将小白鼠固定在小铝匣内,露出尾部,用碘酒消毒尾部,然后用酒精棉球连

续擦尾部皮肤(必要时用二甲苯擦)使血管扩张。

2. 尾背和左右两侧三根血管皆为静脉,可选一根扩张较好的静脉作接种用。左手拇指捏住尾部的远端,向下弯45°,右手持注射器,于弯处进针静脉,推液0.1毫升。

注意:推注时遇阻力且皮下隆起发白时,表示针头不在血管内应拔出重新进针;如针头在血管内,推注时不感阻力,且可看到血管中血液由于注入液体而后退。接种后逐日观察动物发病情况。

(二)小白鼠鼻内接种(录像)

【材料】

小白鼠、流感病毒鼠肺适应株病毒悬液、无菌小试管、无菌毛细管、麻醉用乙醚、棉球及小玻瓶。

【方法】

1. 首先将沾有乙醚的棉球放入一清洁小玻瓶内。左手握小瓶,右手抓住小白鼠,将其头部塞入瓶口,进行全身麻醉。注意麻醉深度,不宜太浅或太深,太深时易遭致麻醉死亡或非特异性吸入性肺炎,太浅则易在滴种时打喷嚏。

2. 用无菌毛细吸管吸取病毒悬液少许,连同毛细吸管插在无菌试管中备用。

3. 用左手将小白鼠握在手掌中,大拇指及食指抓住小白鼠耳部使其头部朝前并呈仰卧位置,另一手取事先吸有病毒悬液的吸管,慢慢滴出一点于滴管口而不使其自然掉落,呈悬滴状。将悬滴靠近动物鼻尖,动物在呼吸时自然吸入,一般为0.030.05 毫升,不宜过多。

4. 小白鼠慢慢苏醒,在饲养盒中逐日开始发病,发病的症状常为毛耸、咳嗽、不食、甚至死亡。解剖尸体可观察到肺炎或血性病灶。

(三)小白鼠脑内接种

【材料】

脑炎病毒(小白鼠脑脊髓炎病毒)悬液。脑组织先用无菌生理盐水洗去血液,再加10%脱脂奶盐水研磨成101 悬液,然后用3000 /分离心沉淀30 分钟,吸取上清液供接种用。

小白鼠:3 周龄,体重68 克。无菌 0.25 毫升注射器及针头(4 号)、煮针锅、碘酊、棉签。

【方法】

1. 以无菌0.25 毫升注射器抽取脑炎病毒悬液0.1 毫升,去除注射器内的气泡。

2. 取出小白鼠,左手将小白鼠固定,固定时用大拇指和食指捏住小白鼠的头部,左手手掌轻轻按住小白鼠的体部。

3. 右手以棉签蘸以碘酒,消毒小白鼠颞部皮毛(不碰到眼)。

4. 右手拿注射器在小白鼠颞部(眼与耳根连线的中点略偏耳朵的方向)刺入,进入颅腔,进针23 毫米,不要插得太深,注射量为0.020.03 毫升。

5. 注射完毕,将用过得注射器放入煮针锅内煮沸消毒。动物一般在34 天后开始发病,食欲减退,活动迟钝,毛耸,震颤,慢慢发展为麻痹,瘫痪而死亡。

本法适用于一些脑炎病毒的分离培养。

 

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