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大肠杆菌生长曲线的测定


录入时间:2015-3-10 10:30:05 来源:青岛海博生物

 目的

1.学习并掌握细菌生长曲线的特点及其测定的原理,从而了解微生物在一定条件下生长、

繁殖的规律。

2.学习并掌握由生长曲线计算微生物代时的方法。

原理

生长曲线就是将一定量的单细胞微生物接种在适合的新鲜液体培养基中,在适宜温度条件下进行培养,然后以菌数的对数为纵坐标,以生长时间为横坐标,得到的曲线即是,如图20-1 所示。生长曲线一般分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。不同的微生物具有不同的生长曲线,同一微生物在不同条件下培养也会得到不同的生长曲线。生长曲线的测定包括血球计数法、平板菌落计数法、称重法及比浊法等多种。本实验采用比浊法测定。因为细菌悬液的浓度与浑浊度成正比,所以可利用光电比色计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度,并将所测得的光密度值(OD 值)与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线(本试验采用半对数坐标纸绘图)。在曲线上对数生长期范围内,任取两个成倍的OD 值,其相对应的时间差即为该菌代时G

材料

1.菌种:大肠杆菌(Escherichia coli

2.培养基:250ml 三角瓶分装100ml18×180mm 试管分装5ml LB 培养液。

3.灭菌物品:18×180mm 试管,10ml 吸管。

4.仪器:722 分光光度计,恒温摇床。

5.其它:废液缸,擦镜纸,吸水纸,蒸馏水。

方法

1.种子液的培养:将大肠杆菌接入LB 培养液试管过夜培养至OD600 值为1

2.接种:以无菌操作方式向100ml LB 培养液中加入10ml OD600 值为1 的大肠杆菌菌悬液,此时培养液OD600 值为0.1,并记录为“0”时。

3.培养与测定:将接种后的培养液置于37℃下振荡培养,定时取样,每次均取5ml,然后以无菌培养液为对照,在722 光栅分光光度计上,测定OD600 值,并记录。

 

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