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厌氧菌的分离鉴定


录入时间:2015-3-11 9:17:39 来源:青岛海博生物

 一、涂片与染色Smear preparation and stain

本涂片、革染色、镜检菌的形和染色性,并估计标本中大致的含菌量,可用“少量”, “+ ”、“ ++ ”、“ +++”、++++ ”表示。镜检能反映各种厌氧菌的特殊形,同也能为鉴氧菌提供参考和依据。如脆弱杆菌菌体细长,两端尖;韦荣球菌是极小的革兰阴性球菌。氧菌芽胞的位置、形、大小对鉴定很有意,必要作芽胞形成试验

二、标本接

一般本接3 个血脂平板,分放置于有氧、无氧和含5 %~ lO % CO2 境中培。如果只要求氧菌,只需接l 氧血脂平板,也可增加1 个相选择厌氧血脂平板。便于在混合培中及早发现厌氧菌,一般将本分3 段划线,在第1 和第2 段交界处贴1 甲硝(5 mg/)片,若出现隐约抑菌圈,提示有氧菌生

不同氧菌的生速度和菌落形各异,色素也有不同,生与否也有助于定,根据上述特征,可初测厌氧菌的种类

1.兰阴性杆菌

(1)BBE 脂平板上有灰黑色、直径 >lmm 的菌落,菌落周有黑色的,可初步鉴脆弱杆菌。

(2) 在卡那万古溶血脂平板上,有棕色或黑色菌落,或用伍德灯照射有砖红光者,为产黑素普雷沃菌。

(3)菌落沉入脂内,使培基表面留有小坑者,可能是解脲杆菌和纤细拟杆菌。

(4)菌落表面有小斑点,或如面包屑,合涂片所,可初步鉴具核梭杆菌。

2. 兰阴性球茵菌体很小,排列成双、短或小堆,菌落小,不透明,可能是小韦荣球菌。

3. 阳性球菌排列成短不等的,可能是消化球菌。

4. 阳性无芽月色杆菌

(1)菌落呈臼齿形、粗糙,核腋分泌物中有硫黄样颗粒,可能是放线菌。

(2)菌体呈X Y V 排列,菌落小,灰白,不透明,可能是丙酸杆菌。

5. 阳性芽胞杆菌只要有芽胞,即可梭菌属。菌落有双溶血,卵黄平皿上卵磷脂酶试验Nagler 试验阳性,涂片染色阳性短粗杆菌,有芽胞,有英膜,可为产气荚膜梭菌。

三、耐氧试验

氧平板上有菌生长时了确定是否为厌氧菌,必做耐氧试验。从脂平板上挑取4~5 个性状不同的菌落,个菌落分别转种2 需氧血脂平板和1 块厌氧血脂平板(脂平板可划4~6 区,一个可疑菌落) ,然后将平板分放置在需氧、二氧化碳和境中培

凡在境生,而在需氧和二氧化碳境中不生为专氧菌(3 - 48 A ) ;在需氧和境中均能生兼性氧菌(3 - 48 B ) ;在需氧和二氧化碳境中生,而在境中不生为专性需氧菌(3 - 48 C ) ;在需氧、境中均不生或生不佳,而在二氧化碳境中生良好的需二氧化碳菌(3 - 48 D )

四、试验

可依据氧菌的菌体染色形、菌落特性以及某些抗生素的敏感性作出初步鉴定。最后行生化反末代谢产物等检查

生化试验主要包括多类发试验、呵|试验、硝酸盐还试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂酶试验、明胶液化试验及胆汁肉长试验和硫化氢试验等。目前用于氧菌快速定有胞外酶试验 4 h 即可;微生物定系,如VITEK-ANI MicroScan- ANI 等也可菌。

氧菌分离定的程中,需注意下列事: 氧菌本在采集和运程中必与空气隔(氧菌暴露于空气中时间可死亡) 必在30 min 内完成,同时应避免正常菌群的染。②培基要新配制,若存太久,有氧气溶解在表面或有氧化物在培基中,不利于氧菌生。③ 若菌落太小,需用放大镜观察菌落。④作耐氧试验,要求从脂平板上挑取4 ~ 5 个性状不同的菌落,分需氧和氧血脂平板,置于需氧、二氧化碳和境中培。⑤ 如作胞外酶鉴定, 一定要有足的菌液度。

 

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