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溶血试验



录入时间:2015-3-19 11:58:35 来源:青岛海博生物

 

1.血平板溶血试验

培养基:营养琼脂,含有0.85%的氯化钠和5%体积分数的去纤维蛋血或经草酸盐处理过的血。马血对链球菌很合适,但其他的微生物(例如葡萄球菌)则用其他的动物血〈例如羊、兔子、牛)要更好一些。营养琼脂培养基熔化后,冷却到50,无菌地加入已灭菌的血细胞溶液(10ml琼脂加0.5ml)。用手旋转或翻转试管使其混合,倒入培养皿中。另外,也可以在培养皿中先加入〔5—10ml营养琼脂,凝固后在营养琼脂上再倒人5ml血琼脂,形成薄层,凝固。

试验方法:对于葡萄球菌,在平板上划线接种,以得到单个菌落;如果是链球菌,以倾倒平板接种,也可以划线接种。在最佳生长温度培养2d

结果记录:如菌落周围有清晰的环带出现,则表明有溶现象。链球菌的β-溶血素作用能产生边缘清晰的环带;α-溶血素作用产生的环带呈灰绿色且边缘很模糊。但要注意,α-溶血素和β-溶血素的特征对于链球菌和葡萄球菌完全不同。对于葡萄球菌,则α-溶血素能产生清晰的环带,而β-溶血素则产生暗色的模糊环带。但是,葡萄球菌中的α-溶血素有时却被认为是β-溶血素。因此,为避免混淆,最好是对溶血素的类型加以描述,而不仅是统称为溶血素。

2.加强溶血试验CAMP

加强溶血试验是用于检测B族链球菌中的一些菌株和某些特定菌株产生的细胞外可扩散的多肽CAMP因子)。多肽与葡萄球菌中的β-溶血素可协同作用,使羊血琼脂中两种菌划线培养的结合处产生加强的溶血作用。甚至非溶血的B族链球菌的CAMP测试也呈阳性。后来该方法被用来区分李斯特菌的不同菌种。

培养基:羊血(体积分数为5%)琼脂。在检测李斯特菌属时,由于羊血中常携带有李斯特菌属的抗血清,必须先用盐水冲冼羊血的红血球,然后再重新悬浮于灭菌的盐水中。

试验方法

1链球菌检测将产生β-溶血的金黄色葡萄球菌培养液横穿羊血琼培养基平板划一条线。在直线的一用待培养液垂直划线,该线与金葡萄球菌培养液的划线相距1-2mm37℃培养18-24h

2李斯特菌的检测 将产生β-溶血的金色葡萄球培养液穿冲过的羊血琼脂培养基板划一条直线。用马红球培养液另一条平行线,两线相距4cm左右用待测菌液于金葡萄球菌和马红球菌划线,与金黄色葡萄球菌菌培养液和马红球菌培养液的线县局1-2mm18-24h

 

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