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细菌革兰氏染色



录入时间:2015-3-24 10:38:05 来源:青岛海博生物

 

一、目的

了解细菌革兰氏染色原,并掌握其方法。

二、原理

氏染色法是一种要的鉴别细菌的方法根据各种细对这种染色法的反应不同,可把细菌分为革兰氏阳性和兰氏阴性两类。因此,该方法对于细菌的分类鉴定及生产应用都有重要意义。其染色原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不,革氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚,交联而成的肽聚糖网状结构致密,经乙醇脱色处发生脱水作用,使孔径缩小,能降低,结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色,结果使细胞呈现紫色;而革兰氐阴性菌肽聚糖层薄,网状结构交联少,脂类含量较高,经乙醇处理后脂类被溶解,细胞壁孔径变大,通透性增加结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁,使细胞脱色。此时,再经复红或沙黄等色染料复染细胞红色。

在革兰氏染色中,有两个值得注意的问题。一是酒精脱色的时间要掌握恰当随涂
不同,脱色的时间也不完全一样,一般以溶出色素为止。若脱色过度则阳性菌被误染为阴性菌而脱色不够时阴性则被误染为阳性。二是培养物的老幼对染色结果也有影响,革兰氏染色检查的菌,必须是新培养物

三、材料

1.菌种 培养10~12h枯草杆菌及大肠杆菌

2.仪器及其他 微镜、接种环、精灯、载玻片、玻片架、75%酒精消缸、镊子、无菌水、草酸铵结晶紫、Lugol氏碘液、95%洒精、蕃红染液、吸水纸、特种蜡笔。

四、方法与步骤

1.涂片 涂片、燥、定同简单染色法。

2.初染 滴加草酸铵结紫于涂部位染色时间1min
3.水洗 用水轻轻冲洗,洗去多余的染料。
4.滴加Lugol氏碘液1~2min,紫色部分变黑为止。
5.水洗 倾去Lugol氏碘液水洗。

6.脱色 滴加95%以上的酒,约3060s (色素不溶出为止)
7.水洗 同5水洗 

8.复染 滴加蕃红或沙黄染1~2min
9.水洗 同5水洗。

10.干燥 自然干燥或用吸水纸吸干。

11.镜检 用油镜观察,记录结果。

 

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