细菌大小的测定

一、实验目的和内容
目的：学会测微尺的使用和计算方法及对球菌和杆菌的测量。
内容：1. 认识测微尺，学习目镜测微尺的标定。
2．测定金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌体的大小。
二、实验材料和用具
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的玻片标本。
香柏油、二甲苯；
显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。
三、操作步骤
  l．测微尺的构造   显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成，目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在5mm刻尺上分50份(图14一lC)。目镜测微尺每格实际代表的长度随使用接目镜和接物镜的放大倍数而改变，因此在使用前必须用镜台测微尺进行标定。
镜台测微尺为一专用中央有精确等分线的载玻片(图14—1A)，一般将长为1mm的直线等分成100个小格，每格长0.0lmm即10μm，是专用于校正目镜测微尺每格长度的。
2．目镜测微尺的标定   把目镜的上透镜旋开，将目镜测微尺轻轻放在目镜的隔板上，使有刻度的一面朝下。将镜台测微尺放在显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上。先用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，并使两尺左边的一条线重合，向右寻找另外一条两尺相重合的直线(图15—lB)。
3．计算方法
标定公式：
 
目镜测微尺每格长度（μm）=两条重合线间镜台测微尺的格数×10
÷两条重合线间目镜测微尺的格数
 
例如，目镜测微尺20个小格等于镜台测微尺3小格，已知镜台测微尺每格为10μm，则3小格的长度为3×10=30μm，那么相应地在目镜测微尺上每小格长度为3×10÷20=1.5μm。用以上计算方法分别校正低倍镜、高倍镜及油镜下目镜测微尺每格实际长度。
4．菌体大小的测定  将镜台测微尺取下，分别换上大肠杆菌及金黄色葡萄球菌玻片标本，先在低倍镜和高倍镜下找到目的物，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的大小。先量出菌体的长和宽占目镜测微尺的格数，再以目镜测微尺每格的长度计算出菌体的长和宽。并详细记录于表15—1中。
例如，目镜测微尺在这架显微镜下，每格相当于1.5μm，测量的结果，若菌体的平均长度相当于目镜测微尺的2格，则菌体长应为3×1.5μm=3.0μm。
一般测量菌体的大小，应测定10～20个菌体，求出平均值，才能代表该菌的大小。
四、注意事项
1．镜台测微尺的玻片很薄，在标定油镜头时，要格外注意，以免压碎镜台测微尺或损坏镜头。
2．标定目镜测微尺时要注意准确对正目镜测微尺与镜台测微尺的重合线。
五、演示
1．目镜测微尺、镜台测微尺的显微镜下示教。
2．标定及测量方法示范。
六、实验报告
1．目镜测微尺标定结果：
低倍镜下     倍目镜测微尺每格长度是      μm。
高倍镜下     倍目镜测微尺每格长度是      μm。
油镜下     倍目镜测微尺每格长度是      μm。
2．菌体大小测定结果：
菌号 大肠杆菌测定结果 金黄色葡萄球菌的直径大小测定结果
目镜测微尺格数 实际长度 目镜测微尺格数  实际直径/µm
宽 长 宽 长
1            
2            
3            
4            
5            
6            
7            
8            
9            
10            
均值            
试与己知的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的大小作一比较是否一致？为何？
七、问题和思考
1．为什么更换不同放大倍数的目镜和物镜时必须重新用镜台测微尺对目镜微尺进行标定？
2．若目镜不变，目镜测微尺也不变，只改变物镜，那么目镜测微尺每格所测量的镜台上的菌体细胞的实际长度（或宽度）是否相同？为什么？
   
   

 

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