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与脂类、磷脂类等物质的反应



录入时间:2015-3-27 10:49:02 来源:青岛海博生物

 

1.丁酸甘油酯的水解作用

培养基:三丁酸油酯琼脂培养基,是在酵母浸膏琼脂中加入三丁酸甘油酯制成,pH为7.5。三丁酸甘油酯加后,会发生乳化作用,因此,制作时最好用电动混合器或电动拌器作为搅拌工具。连续3d蒸汽灭菌,每次30min。培养基可铺成平板使用,先将酵母浸膏琼脂培养基铺成平板,再将熔化的三丁酸甘油酯琼脂培养基覆盖在酵母浸膏琼上。也以使用市售的配制好的培养基。

平板划线接种,横穿表面划线一次,在最佳生长温度培养214d

结果记录:三丁酸甘油酯水解使培养基变得透明,并形成一个清晰环带,以亳米为单位录下从菌落边缘到清晰环带边缘的宽度。该反应通常被认为是脂肪酶的典型反应,虽然三丁酸甘油酯不是结构复杂的脂肪,细的蛋白水解酶也能将其水解。

2.乳脂、橄榄油、人造奶油的水解作用(脂解作用)

1乳脂琼脂和橄榄油琼脂培养基:由pH7.8的酵母浸膏琼脂和5%的乳脂或橄榄油所组成。剧烈摇动试管使培养基发生乳化作用。
  在倒好且干燥的平板表面划线接种。最佳生长温度培养2~14d
   试剂:饱和硫酸铜溶液。

结果记录:用810ml试剂充满平皿,静置1015min,倒掉试,用流水轻轻冲洗平皿约1h以将剩余的硫酸铜清洗干净。有水解作用发生的地方会有蓝绿色的环带出现,这是由于脂解作用发生时,游离脂肪酸与铜离子形成不溶性的铜盐。

2维多利亚蓝乳脂琼脂和维多利亚蓝人造奶油琼脂培养基:人造奶油制成的培养基要比奶油制成的培养基更为稳定。人造奶油的选择可能会影响结果的观察,因为有些人造奶油是由单一的脂类物质制成的。

维多利蓝指示剂可以指示游离脂肪酸的存在。但能抑制某些细菌菌株的生长,因此,它不适合从混合菌株中分离具脂解作用的菌株。

结果记录发生脂解作用时,游离脂肪酸则与碱性维多利亚蓝结合生成深蓝色的盐类。在微生物的周围或下方产生深蓝色环带,则表明发生了脂解作用。培养基的背景色应为略带桃色的淡紫色。

3.吐温化合物的水解

吐温是脂肪酸的聚氧乙烯山梨聚糖酯。除吐温外,培养基中还应含有可溶性盐(通
常为氯化钙〉;可通过检测钙盐的沉淀来检测释放出的脂肪酸。培养基中可添加吐温20(月桂酸酯)、吐温40〔棕榈酸酯〉、吐温60〈硬脂酸酯)或吐温80
油酸酯。最为常用的是吐温80。

在倒好并干燥的吐温琼脂平板表面划线接种或点接种,在最佳生长温度培养17d
结果记录:菌落周围形成了不透明环带,是因为形成了游离脂肪酸钙盐,这表明菌体为脂肪酸酶阳性反应。另外吐温被水包围形成很多微团,而脂肪酶是一种在水
酯分界
面作用于不溶于水的酯或脂肪的一种酶。所以
温的存在能促进脂肪酶和其他酯酶的作用。

4卵磷脂的水解作用

(1)卵黄琼脂本培养基由营养琼脂、氯化钠和蛋黄乳组成,其中氯化钠的含量为0.9%,蛋黄乳的含量为10%

在已倒培养基的平板表面划线接种。在最佳生长温度培养1~4d
结果记录:卵磷腊酶作用(例如卵黄培养基卵憐脂的水解)的结果是在微生物生长区域的周围形成不透明的环带。以亳米为单位记录环带的宽度。

(2)卵黄肉汤在营养肉汤中加入0.9%氯化钠和10%(体积分数)蛋黄乳。
接种后置于最佳生长温度培养

结果记录:卵磷脂酶作用使蛋黄肉汤培养基形成浊斑,通常伴随有黏稠的凝乳形成。

 

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