与脂类、磷脂类等物质的反应

1.三丁酸甘油酯的水解作用

培养基：三丁酸甘油酯琼脂培养基，是在酵母浸膏琼脂中加入三丁酸甘油酯制成，pH为7.5。三丁酸甘油酯加入后，会发生乳化作用，因此，制作时最好用电动混合器或电动搅拌器作为搅拌工具。连续3d蒸汽灭菌,每次30min。培养基可铺成平板使用，先将酵母浸膏琼脂培养基铺成平板，再将熔化的三丁酸甘油酯琼脂培养基覆盖在酵母浸膏琼脂上。也可以使用市售的配制好的培养基。

平板划线接种，横穿表面划线一次，在最佳生长温度培养2〜14d。

结果记录：三丁酸甘油酯水解使培养基变得透明，并形成一个清晰环带，以亳米为单位记录下从菌落边缘到清晰环带边缘的宽度。该反应通常被认为是脂肪酶的典型反应，虽然三丁酸甘油酯不是结构复杂的脂肪，细菌的蛋白水解酶也能将其水解。

2.乳脂、橄榄油、人造奶油的水解作用(脂解作用）

（1）乳脂琼脂和橄榄油琼脂培养基：由pH7.8的酵母浸膏琼脂和5%的乳脂或橄榄油所组成。剧烈摇动试管使培养基发生乳化作用。
  在倒好且干燥的平板表面划线接种。最佳生长温度培养2~14d。
   试剂：饱和硫酸铜溶液。

结果记录：用8〜10ml试剂充满平皿，静置10〜15min，倒掉试剂，用流水轻轻冲洗平皿约1h以将剩余的硫酸铜清洗干净。有水解作用发生的地方会有蓝绿色的环带出现，这是由于脂解作用发生时，游离脂肪酸与铜离子形成不溶性的铜盐。

（2）维多利亚蓝乳脂琼脂和维多利亚蓝人造奶油琼脂培养基：人造奶油制成的培养基要比奶油制成的培养基更为稳定。人造奶油的选择可能会影响结果的观察，因为有些人造奶油是由单一的脂类物质制成的。

维多利亚蓝指示剂可以指示游离脂肪酸的存在。但能抑制某些细菌菌株的生长，因此，它不适合从混合菌株中分离具脂解作用的菌株。

结果记录_：发生脂解作用时,游离脂肪酸则与碱性维多利亚蓝结合生成深蓝色的盐类。在微生物的周围或下方产生深蓝色环带，则表明发生了脂解作用。培养基的背景色应为略带桃色的淡紫色。

3.吐温化合物的水解

吐温是脂肪酸的聚氧乙烯山梨聚糖酯。除吐温外，培养基中还应含有可溶性钙盐(通
常为氯化钙〉；可通过检测钙盐的沉淀来检测释放出的脂肪酸。培养基中可添加吐温20(月桂酸酯）、吐温40〔棕榈酸酯〉、吐温60〈硬脂酸酯)或吐温80（油酸酯）。最为常用的是吐温80。

在倒好并干燥的吐温琼脂平板表面划线接种或点接种，在最佳生长温度培养1〜7d。
结果记录：菌落周围形成了不透明环带，是因为形成了游离脂肪酸钙盐，这表明菌体为脂肪酸酶阳性反应。另外吐温被水包围形成很多微团，而脂肪酶是一种在水—酯分界
面作用于不溶于水的酯或脂肪的一种酶。所以吐温的存在能促进脂肪酶和其他酯酶的作用。

4．卵磷脂的水解作用

(1)卵黄琼脂本培养基由营养琼脂、氯化钠和蛋黄乳组成，其中氯化钠的含量为0.9%，蛋黄乳的含量为10%。

在已倒培养基的平板表面划线接种。在最佳生长温度培养1~4d。
结果记录：卵磷腊酶作用(例如卵黄培养基卵憐脂的水解)的结果是在微生物生长区域的周围形成不透明的环带。以亳米为单位记录环带的宽度。

(2)卵黄肉汤在营养肉汤中加入0.9%氯化钠和10%(体积分数)蛋黄乳。
接种后置于最佳生长温度培养

结果记录：卵磷脂酶作用使蛋黄肉汤培养基形成浊斑，通常伴随有黏稠的凝乳形成。

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