铜绿假单胞菌检测（滤膜法）

原理

将250mL水样用孔径为0.45μm的滤膜过滤，并将滤膜移至CN琼脂培养基上，于36℃士1℃恒

温箱中培养48h，能够在溴化十六烷基三甲铵选择性培养基上生长并产生绿脓菌素，或者能够在溴化十六烷基三甲铵选择性培养基上生长并且氧化酶呈阳性、紫外光（360±20nm）照射下能发荧光、能够利用乙酰胺产氨的革兰氏阴性无芽孢杆菌，经证实为铜绿假单胞菌，则其检测结果为阳性。

培养基和试剂

假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂（配制好之后低温避光保存）

金氏B（King’s B）培养基（配制好之后低温避光保存）

乙酰胺肉汤（用蒸馏水配制，配置好之后低温避光保存）

营养琼脂

氧化酶试剂

钠氏试剂（配制好之后低温避光保存）

设备和仪器

玻璃器具：所有玻璃器皿使用前需121℃高压蒸汽灭菌15分钟

恒温培养箱：36℃±1℃

紫外灯：波长应为360±20nm

滤膜：直径47mm，微孔径为0.45μｍ（处理方法：如滤膜未经灭菌，则使用前需先将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次15 min。前两次煮沸后需更换水，用蒸馏水洗涤2次～3次，以除去残留溶剂。建议使用一次性无菌滤膜。）

显微镜：10×～100×

冰箱：0℃～8℃

操作流程图

上一篇：PFGE概述

下一篇：Saccardo半知菌体系