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食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验


录入时间:2015-4-29 11:32:20 来源:青岛海博生物

操作步骤

样品处理:

  冷冻样品应在45℃以下不超过15 min或在2℃~8℃不超过18 h解冻。若不能及时检验,应放于-15℃左右保存;

  非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验。若不能及时检验,应置于2℃~8℃冰箱保存,在24 h内检验。

样品制备

  以无菌操作取样品25 gmL),加入PBS 225 mL,用旋转刀片式均质器以8000 r/min10000 r/min均质1 min2 min,或拍击式均质器拍击2 min。如无均质器,则将样品放入无菌乳钵中磨碎,然后称取25 gmL)置合适的容器中,加225 mL PBS,充分振荡混匀。制成1:10的样品匀液。

增菌

  取110的样品匀液10 mL(液体样品可以选择原液),加入90 mL胰酪胨大豆多粘菌素肉汤中,于30 ℃±℃培养24 h±2 h

分离

  取胰酪胨大豆多粘菌素增菌液划线接种于MYP琼脂平板上。于30 ℃±℃培养24 h48 h。观察平板上生长的菌落。在MYP琼脂平板上,典型菌落为灰白色至微粉红色,周围有白色至淡粉红色沉淀环。

纯培养

  从每个平板选取至少5个典型或可疑菌落,划线接种于营养琼脂平板做纯培养,30 ℃±℃培养24 h±2 h,进行确证实验。营养琼脂平板上,典型菌落在为灰白色,偶有黄绿色,不透明,表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状,边缘常呈扩展状,直径为4 mm10 mm

样品的稀释

     吸取110的样品匀液1 mL加到装有9 mL PBS的稀释管中,充分混匀制成1100的样品匀液。据对样品污染状况的估计,按上述操作,依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次,换用11mL无菌吸管或吸头。

平板计数

  选择23个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度分别吸取0.1mL接种到MYP琼脂平板上,每稀释度接种两个MYP琼脂平板。用无菌L棒涂布整个平板,注意不要触及平板边缘。使用前,如MYP琼脂平板表面有水珠,可放在25℃ ~ 50℃的培养箱里干燥,直到平板表面的水珠消失。

  涂布后,将平板置于30 ℃±℃培养24 h±2 h后(原标准为36 ℃±℃培养12 h20 h) ,选取具有15个~150个典型或可疑蜡样芽胞杆菌菌落的平板,进行计数。并计算同一稀释度两个平板的平均菌落数。如果菌落不典型,可继续培养18 h24 h再计数。

  计数后,从每个平板选取至少5个已计数的典型或可疑菌落,如果一个平板上少于5个典型或可疑菌落,则取所有典型或可疑菌落,分别划线接种于营养琼脂平板, 30 ℃±℃培养24 h±2 h,进行确证实验。

  根据确证实验确定为蜡样芽胞杆菌的菌落数,按比例计算出该平板上蜡样芽胞杆菌菌落数,然后计算同一稀释度两个平板的平均蜡样芽胞杆菌数,再乘其稀释倍数,再乘以10,即得每gmL)样品中蜡样芽胞杆菌数并作出报告。

 

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