免疫学检测技术

一、概述

    抗原与抗体的结合反应是一切免疫测定技术的最基本原理。在此基础上结合一些生化或理化方法作为信号显示或放大系统即可建立免疫测定法，如放射免疫测定法、酶免疫测定法、荧光免疫测定法等。一个成功的免疫测定法必须具备3个要素：性能优良的抗体、灵敏和专一性的标记物和高效的分离手段。按照是否使用标记物分为标记免疫测定法和非标记免疫测定法，后者又称为经典免疫测定法；按反应介质分为均相或非均相(免疫复合物需分离后检测)免疫测定法；按反应状态分为平衡态或非平衡态免疫测定法。按照标记物种类，标记免疫测定法又分为放射性标记测定法和非放射性标记测定法。

目前最常用的免疫学检测技术如下：

（1）放射免疫测定技术  

（2）酶免疫测定技术

（3）荧光免疫测定技术

（4）发光免疫测定技术

（5）胶体金免疫测定技术

二、酶联免疫吸附试验(ELISA)

（一）ELISA的基本原理

 ELISA(Enzyme-Linked immunosorbent assay)的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。这一方法的基本原理如下。

 （1）使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，井保持其免疫活性；

 （2）使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性．又保留酶的活性。

（二）ELISA的类型

 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型。

1 双抗体夹心法测抗原

2 双抗原夹心法测抗体

3 间接法测抗体

4 竞争法测抗体

5 竞争法测抗原

（三）ELISA的材料与试剂

 完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；酶标记的抗原或抗体（结合物）；酶的底物；阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；结合物及标本的稀释液；洗涤液；酶反应终止液。

1 免疫吸附剂 

2 结合物 

3 酶的底物

4 洗涤液

5 酶反应终止液

6 阳性对照品和阴性对照品

7 参考标准品

三、磺胺二甲嘧啶的间接竞争ELISA检测

（一）人工完全抗原的合成

（二）合成抗原的鉴定

（三）抗体的制备与纯化

（四）标准竞争抑制曲线的制作

（五）畜产品中SM2残留的ELISA检测

（六）方法评价

1  特异性

2  灵敏度

3  准确度

4  精确度

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