PCR检测技术

一、概述

    PCR又称聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction)，是1985年由美国的Kary Mullis首创并由美国Cetus公司开发的一项体外扩增DNA的方法。应用该方法可使极微量的特定DNA片段在几小时内迅速扩增至百万倍，因而一经问世便在短短的数年内就得到了迅速发晨和实际应用，并在原有基础上结合各种生化分子生物学技术衍生出了许多改良技术。这些技术显示出了巨大的潜力，发挥着越来越大的作用，也正因为如此它们被誉为20世纪80年代分子生物学革命和生物技术的飞跃。

（一）PCR原理

     PCR是依据DNA模板的特性，模仿体内的复制过程，在体外合适的条件下以单链DNA为模板，以人工设计和合成的寡核苷酸为引物，利用热稳定的DNA聚合酶延5’-3’方向掺人单核苷酸来特异性的扩增DNA片段的技术。

（二）PCR反应体系

     PCR反应体系主要由引物、dNTP、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)、缓冲液、Mg2+和核酸模板组成。

（三）PCR反应参数

     在PCR反应中每轮循环的各步反应时间不应过长，以免降低TaqDNA聚合酶的活性。下面介绍PCR反应中的一些具体参数。

1.变性    

2.退火  

3.延伸  

4.循环次数

（四）常见的PCR种类

1.热启动PCR    

2.一步单管PCR    

3.多重PCR

4.依赖PCR的DNA指纹图谱技术  

5.PCR-单链构想多态性分析

6.mRNA差异显示技术  

7.随机引物扩增DNA多态性（RAPD）

8.以微卫星DNA介导的PCR技术

9.基因间重复性回文片段（REP）和基因内重复性一致序列（ERIC）的扩增

10.扩增片段长度多态性分析（AFLP）

11.限制性长度多态性分析（RFLP）

12.用于RNA病毒检测的核酸扩增技术

（五）PCR技术用于检测的主要步骤

（1）运用化学手段对目标DNA进行提取。

（2）设计并合成引物，引物设计或合成的好坏直接决定PCR扩增的成效。

（3）进行PCR扩增。

（4）克隆并筛选鉴定PCR产物，将扩增产物进行电泳、染色，在紫外光照射下可见扩增特异区段的DNA带．根据该带的不同即可鉴定不同的DNA。

（5）DNA序列分析

上一篇：2015版中国药典微生物项变化的应对策略—菌种

下一篇：转基因食品的检测技术