培养基的实验室制备

录入时间:2015-6-2 11:56:30 来源：青岛海博生物

1 一般要求

正确制备培养基是微生物检验的最基础步骤之一，使用脱水培养基和其他成分，尤其是含有有毒物质（如胆盐或其他选择剂）的成分时，应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。培养基的不正确制备会导致培养基出现质量问题（见附录A）。

使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制。如重量（体积）、pH、制备日期、灭菌条件和操作步骤等。

实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息，如：培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积（分装体积）、无菌措施（包括实施的方式、温度及时间）、配置日期、人员等，以便溯源。

2 水

实验用水的电导率在25℃时不应超过25 μS/cm(相当于电阻率≥0.4 ΜΩcm)，除非另有规定要求。

水的微生物污染不应超过103 CFU/mL。应按GB 4789.2，采用平板计数琼脂培养基，在36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h进行定期检查微生物污染。

3 称重和溶解

小心称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末），先加入适量的水，充分混合（注意避免培养基结块），然后加水至所需的量后适当加热，并重复或连续搅拌使其快速分散，必要时应完全溶解。含琼脂的培养基在加热前应浸泡几分钟。

4 pH 的测定和调整

用pH计测pH，必要时在灭菌前进行调整，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却至25 ℃时，pH应在标准pH±0.2范围内。一般使用浓度约为40 g/L（约1 mol/L）的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5 g/L（约1 mol/L）的盐酸溶液调整培养基的pH。如需灭菌后进行调整，则使用灭菌或除菌的溶液。

5 分装

将配好的培养基分装到适当的容器中，容器的体积应比培养基体积最少大20%。

6 灭菌

6.1 一般要求

培养基应采用湿热灭菌法或过滤除菌法。

某些培养基不能或不需要高压灭菌，可采用煮沸灭菌，如SC肉汤等特定的培养基中含有对光和热敏感的物质，煮沸后应迅速冷却，避光保存；有些试剂则不需灭菌，可直接使用（参见相关标准或供应商使用说明）。

6.2 湿热灭菌

湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行，高压灭菌一般采用121 ℃±3 ℃灭菌15 min，具体培养基按食品微生物学检验标准中的规定进行灭菌。培养基体积不应超过1000 mL，否则灭菌时可能会造成过度加热。所有的操作应按照标准或使用说明的规定进行。

灭菌效果的控制是关键问题。加热后采用适当的方式冷却，以防加热过度。这对于大容量和敏感培养基十分重要，例如含有煌绿的培养基。

6.3 过滤除菌

过滤除菌可在真空或加压的条件下进行。使用孔径为0.2 μm的无菌设备和滤膜。消毒过滤设备的

各个部分或使用预先消毒的设备。一些滤膜上附着有蛋白质或其他物质（如抗生素），为了达到有效过滤，应事先将滤膜用无菌水润湿。

6.4 检查

应对经湿热灭菌或过滤除菌的培养基进行检查，尤其要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等指标进行检查。

7 添加成分的制备

制备含有有毒物质的添加成分（尤其是抗生素）时应小心操作（必要时在通风柜中操作），避免因粉尘的扩散造成实验人员过敏或发生其他不良反应；制备溶液时应按产品使用说明操作。

不要使用过期的添加剂；抗生素工作溶液应现用现配；批量配制的抗生素溶液可分装后冷冻贮存，但解冻后的贮存溶液不能再次冷冻；厂商应提供冷冻对抗生素活性影响的有关资料，也可由使用者自行测定。