海博微信公众号
海博天猫旗舰店
海博微信公众号
海博天猫旗舰店
1.方法提要
本标准采用的的方法是计数浓度法，即通过收集悬浮在空气中的生物性粒子于专门的培养基（选择能证实其能够支持微生物生长的培养基），经若干时间和适宜的生长条件让其繁殖到可见的菌落计数，以判定该洁净室的微生物浓度。
2.人员的职责及培训
洁净室（区）的测试人员应进行本专业的培训并获得相应资格后才能履行对洁净室（区）测试的职责，其中包含涉及的卫生知识和基本微生物知识。
洁净室（区）的测试人员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式，外面的衣服不能带进100000级以上的区域。
3.仪器、辅助设备和培养基
选择合适的浮游菌采样器，包括采用无油的抽气泵，较低的气流流速和较大的采样流量，以保证培养基表面的水分不被吹干。
本测试需要具备仪器、辅助设备和培养基如下：
a)浮游菌采样器；
b)培养皿；
c)培养基（大豆酪蛋白琼脂培养基、沙氏琼脂培养基）
d)恒温培养箱；
e)高压蒸汽灭菌器。
4.浮游菌采样器原理
浮游菌采样器一般采用撞击法原理，可分为狭缝式采样器、离心式或针孔式采样器。狭缝式采样器由内部风机将气流吸入，通过采样器的狭缝式平板，将采集的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上，附着的活微生物粒子经培养后形成菌落。离心式采样器由于内部风机的高速旋转，气流从采样器前部吸入从后部流出，在离心力的作用下，空气中的活微生物的粒子有足够的时间撞击到专用的固形培养基条上，附着的活微生物粒子经培养后形成菌落。针孔式采样器是气流通过一个金属盖吸入，盖子上是密集的经过机械加工的特质小孔，通过风机将收集的细小的空气流直接撞击到平板培养基表面上，附着的活微生物粒子经培养后形成菌落。
5测试要点
5.1必须按照测试仪器的检定周期，定期对仪器作检定。使用校验合格，且在使用有效期内的仪器。
5.2测试仪器在未进入被测区域时，若必需，则先清洁表面，或在相应的洁净室内准备和存放（用保护罩或其他适当地外罩保护仪器）。
5.3在100级洁净室内用纸时，上面应蒙上一张透明不沾尘的覆盖物，在100级洁净室内不能用铅笔盒橡皮。
5.4使用测试仪器时应严格按照仪器说明书操作。
5.4.1仪器开机，预热至稳定后，方可按仪器说明书的规定对仪器进行校正，同时检查采样流量，并根据采样量设定采样时间。
5.4.2采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造。
5.4.3采样管严禁渗漏，内壁应光滑。
5.4.4采样管的长度应根据测点的高度定，尽量减少弯曲。
6培养皿
6.1一般采用90mm×15mm规格的培养皿。可根据所选用采样器选择合适的培养皿。
6.2离心式采样器采用专用的固形培养条。
7培养基
大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或其他用户认可并经验证了的培养基。其配制方法见附录B。
8恒温培养箱
必须定期对恒温培养箱进行校验。
9测试步骤
9.1测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。
9.1.1采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器宜预先放在被测房间内。
9.1.2用消毒剂擦净培养皿的外表面。
9.1.3采样前，先用消毒剂清洗采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。
9.1.4采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。如果消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉晾干。
9.1.5采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒或戴无菌手套操作。
9.1.6采样仪器经消毒后先不放入培养皿，开启浮游菌采样器，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并检查流量并根据采样量调整设定采样时间。
9.1.7关闭浮游菌采样器，放入培养皿，盖上盖子。
9.1.8置采样口于采样点后，开启浮游菌采样器进行采样。
10培养
10.1全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
10.2采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30℃~35℃培养箱中培养，时间不少于2d；采用沙氏培养基（SDA）配制的培养皿经采样后，在20℃~25℃培养箱中培养，时间不少于5d。
10.3每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。
11菌落计数
11.1用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。
11.2若平板上右2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
12注意事项
12.1使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。
12.2对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。
12.3由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
上一篇：铜绿假单胞菌的概述
