阻湿态微生物穿透试验方法

1 菌片制备

   金黄色葡萄球菌ATCC 29213在胰酶大豆琼脂上36℃±1℃下培养18-24h，将2-3个菌落接种至3ml胰酶大豆肉汤中，在36℃±1℃下培养18-24h。用蛋白胨水1:10稀释至浓度为1×104CFU/mL~4×104CFU/mL，对最终菌悬液进行计数。

   打开无菌袋取出仍贴附在智商的聚氨酯膜，将载菌材料片的可浸湿聚氨酯膜面朝上放在洁净度盘子上，为了便于操作，用双面胶带将载菌材料片的四角固定于盘子上。用培养皿盖作为模板在载菌膜上化出一个相应的区域，在该区域涂布1.0ml金黄色葡萄球菌悬浮液，然后将菌片至于56℃干燥大约30min，在干燥期间采用消毒的玻璃涂布器在载菌膜上继续涂布菌悬液，以使菌液均匀分布。

   菌片制备好后当日使用。

2 状态调节

   如需要，按照GB6529对试件进行状态调节，也可在标准正常室温条件下进行状态天界和试验。状态调节的方法应记录在试验报告中。

3 试验设定

   调节控制杆上配重，使试验指施加到琼脂上的力值为3N±0.02N。

   将第一个琼脂培养皿放在转盘上。

4 材料应用

   用下列计数：采用一个由内、外环组成的圆形砝码，总重800g±1g对材料施加标准的绷紧力。将圆柱放在内环中央，再将试件覆盖在圆柱体和内环上，将除去贴附纸后的菌片染菌面向下放在试件上。最后在聚氨酯膜上覆盖一层HDPE膜，向下推紧外环，使三层材料牢固的加在两个环之间。

5 试验

   将上述环组件轻轻搭放在第一个去下盖子的琼脂培养皿上，钢环自由悬放于旋转盘的外面，将试验指置于皿口内测的HDPE膜上，这样试件可与琼脂表面接触。试验指按上述规定施加3N压力，是仪器运行15min。

15min后立即取下环套件放在一边。

从旋转盘上取下第一个培养皿并放上皿盖。马上将第二个培养皿和环套件放在旋转盘上。

对后面的四个培养皿用同一个环套组件执行上述步骤。

五个培养皿完成试验后，取下菌片并弃去，将试件反转，上面朝下用HDPE膜覆盖。

在第六个培养皿上操作15min,即完成第一个平行试验组。

其余4片试件同样按上述方法各运行六个培养皿各15min，每片试件使用一片新鲜制备的菌片。

如果琼脂表面聚有液体，将其置于洁净台上干燥，将各琼脂培养皿加盖置于36℃±1℃培养48h。

计数每只培养皿中金黄色葡萄球菌菌落数，培养皿中心15min半径区域内的菌落数不计。

如果右一个皿或多个皿的计数大于750CFU（不包括上述的培养皿中心15min半径区域内的菌落数），可重新惊醒试验。如果重新试验仍有一个或多个皿计数大于750CFU，表明该材料不可能具有足够的屏障特性，可终止试验。

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