实验室环境和人体表面微生物的检查

一、目的要求
1. 证明实验室环境与体表存在微生物。
2．比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。
3．观察不同类群微生物的菌落形态特征。
4．体会无菌操作的重要性。
二、基本原理
平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养1～2d内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。
三、器材
l．培养基   肉膏蛋白胨琼脂平板。
2．仪器或其他用具   无菌水，灭菌棉签(装在试管内)，接种环，试管架，酒精灯或煤气灯，记号笔，废物缸。
四、操作步骤
每组在“实验室”和“人体”两大部分中各选择一个内容做实验，或由教师指定分配，最后结果供全班讨论。
l．写标签
任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源(如实验室空气或无菌室空气或头发等)，字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。
培养皿的记号一般写在皿底上。如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。
2．实验室细菌检查
(1)空气   将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。lh后盖上两个皿盖。
(2)实验台和门的旋钮
①用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线，如图27-l。
②取棉签   左手拿装有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞(或试管帽)，将其取出(图27-2，B)，将管口很快地通过煤气灯(或酒精灯)的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出(图27-2，C)。塞回棉塞(或试管帽)(27-2，D)，并将空试管放在试管梁上。
③弄湿棉签    左手取灭菌水试管，如上法拨出棉塞(或试管帽)并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，塞回棉塞(或试管帽)，并将灭菌水试管放在试管梁上。
④取样   将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约2cm2的范围．
⑤接种   在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝．再将棉签伸人，在琼脂表面顶端接种，即滚动一下，立即闭合皿盖。并按图27-2E和F，将原放棉签的空试管拨出棉塞(或试管帽)，烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。
⑥划线   另取接种环在火焰上灭菌，按图3—3方法进行划线，整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。
3．人体细菌的检查
（1）手指(洗手前与洗手后)
①分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后(班级、姓名．日期)。
②移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板的表面，轻轻地来回划线，盖上皿盖。
③用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖。
(2)头发    在揭开皿盖的琼脂平板的上方，用手将头发用力摇动数次，使细菌降落到玻脂平板表面，然后盖上皿盖。
A. 接种时，用左手将平皿开启一缝；B.棉签伸入平板接种;
C.用己灭菌并冷却了的接种环划线; D. 第二部分划线; E.最后部分划线
 (3)咳嗽   将去皿盖的琼脂平板放在离口约6～8cm处，对着琼脂表面用力咳嗽，然后盖上皿盖。
(4)鼻腔  
①按照实验台检查法的步骤②和③，取出棉签，并将其弄湿。
②用湿棉签在鼻腔内滚动数次。
③按实验台检查法的步骤⑤和⑥，接种与划线，然后盖上皿盖。
4．将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，放37℃培养箱，培养1～2d。
五．结果记录方法
(1)菌落计数   在划线的平板上，如果菌落很多而重叠，则数平板最后1/4面积内的菌落数。不是划线的平板，也一分为四，数l/4面积的菌落数。
(2)根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌数量太多，会使很多菌落生长在一起，或者限制了菌落生长而变得很小，因而外观不典型，故观察菌落的特点时，要选择分离得很开的单个菌落。
菌落特征描写方法如下：
①大小   大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。
②颜色   黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。
③干湿情况   干燥、湿润、粘稠。
④形态   圆形、不规则等。
⑤高度   扁平、隆起、凹下。
⑥透明程度   透明、半透明、不透明。
⑦边缘   整齐、不整齐。
五、实验报告
1．结果
(1)将你自已的平板结果记录于下表中。
（2）与其他同学所做的结果进行比较
2．思考题
(1)比较各种来源的样品，哪一种样品的平板菌落数与菌落类型最多？
(2)人多的实验室与无菌室(或无人走动的实验室)相比，平板上的菌落数与菌落类型有什么区别？你能解释一下造成这种区别的原因吗？
(3)洗手前后的手指平板，菌落数有无区别？
(4)通过本次实验，在防止培养物的污染与防止细菌的扩散方面，你学到些什么？有什么体会。
   
   

 

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