沉降菌监测

1、方法

《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》（GB/T16294-2010）

沉降法：通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿中，经若干时间，在适宜的条件下使其繁殖到可见菌落并进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此评定洁净室（区）的洁净度。

2、沉降皿

沉降皿：直径90mm*15mm

培养基：大豆酪蛋白琼脂（TSA）

        沙氏琼脂（SDA）

培养条件：同浮游菌监测

培养基质量：

  应符合2015年版《中国药典》中“（1921）药品微生物实验室质量管理指导原则”的相关要求。

1）培养基制备要求

2）培养基贮藏要求

3）培养基的质量控制试验

  用于环境监控的培养基须特别防护，最好要双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行100%的预培养以防止外来的污染物带到环境中及避免出现假阳性结果。

关键问题：暴露蒸发失水，会降低培养基的某些微生物的生长。

  单向气流暴露4小时，TSA版失重16%

  为了延长暴露和培养基的时间，同时确保平皿仍然提供可靠的结果，沉降皿可以浇注到一个特定的高浇注线。

包装：通常是双重或三重包装，这取决于洁净室的级别。最外层包装进入下一个最高级别的洁净室中之后被移除。对于A级（ISO5级）洁净室和隔离器，三层透明包装时最合适的。

隔离器的沉降皿：最内层的包装材料必须是过氧化氢蒸汽不可渗透的，以确保这种常用的消毒剂不会转移的培养基上，采样后抑制微生物生长，最好使用为隔离器设计的培养基。

3、监测

1）人员的清洁、消毒和着装

2）在温度、湿度、压力的测试之后进行

3）明确测试状态，静态测试人员不得多于2人，一般应动态监测

4）开启净化空调系统

单向流、静态10min以上，非单向流30min以上

5）最少采样点数

注：A级（单向流）面积指送风口表面积；任何小的洁净区采样点不得少于2个。

6）采样位置：

离地面0.8-1.5m左右，高于工作面

关键设备或关键区域，可增加采样点

7）采样次数：每个点1次

8）采样时间：静态30分钟；动态4小时

   单碟暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用对个沉降碟连续进行监测并累积计数。

9）最少培养皿数：

4、注意事项

1）采取一切措施防止采样污染和其他人为对样本的污染。

2）采样注意事项：同悬浮粒子监测

3）培养基质量

4）阴性对照试验  每次或每个区域取1个对照培养皿

5）日常监测：A级区及无菌隔离系统采样点数目应不小于3个且每个采样点的平皿数应不小于1个。

5、结果判断：

每个测点的沉降菌平均浓度必须低于所选定评定标准中的界限。

在静态测试时，若某测点的沉降游菌的平均浓度超过评定标准，应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。

6、限度的理解：A级＜1cfu/碟

   举例：监测了左中右3个位置，1碟/位置

不合格结果：3个沉降碟平均菌落数≥1cfu

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