表面微生物监测

一、目的

目的是确定各种重要表面存在的活体微生物，包括层流工作台，实验设备（集菌仪），实验室人员。

二、方法：接触碟法、擦拭法

1、接触碟法：是将充满规定的琼脂培养基的接触碟对规则表面或平面进行取样，然后至合适的温度下培养一定时间并计数。

适用范围：实验人员及实验台面等

接触碟：直径55cm

取样面积：约为25cm²

结果报告：CFU/碟

培养基：种类、培养条件、培养基质量同沉降菌监测

自制接触碟

与之接触碟（商品化）

三层严密包装，内层真空封装

高压灭菌+钴60辐射灭菌，确保产品无菌

培养基应具有极强的弹性、持水性，不会出现渗水现象。

2-8摄氏度保存，一般保质期半年

可根据客户需求在培养基中添加青霉素酶等催化酶，用于去除生产中产生的抗生素粉尘的抗菌性。

监测步骤：

1）从冷藏柜中取出接触皿，并恢复至室温。

2）将包装整体送入取样地点，在此过程中逐步去掉外面两层包装，最后一层真空包装在操作间打开。

3）打开接触皿上盖，使培养基充分接触待测表面，必要使用手指轻轻按压接触皿外侧底部中心约10秒，轻轻抬起，将上盖从接触皿一侧小心盖上。

4）在接触皿磨砂区域标记取样地点、取样时间和取样人。

5）取样后的清理：用消毒剂或杀孢子剂擦拭测试区域，以消除培养基的残留。

6）将接触皿从洁净室取出，按规定的温度和时间倒置培养。

7）观察、计数

注意：

1）表面微生物检测要在实验结束后进行。

2）消毒剂残留物对监测的影响

测试表面接触时，接触皿往往会接触清洗或消毒洁净室的消毒剂残留物。数百种不同的杀菌剂用于世界各地的制药设施，事实上许多监管机构希望看到轮流使用不同消毒原理的两种消毒剂，这些不同的消毒物质会抑制接触板上污染物的生长。

为抵制这些消毒剂的生长抑制性质，中和剂被添加到培养基中。卵磷脂，聚山梨醇酯80，组氨酸和硫代硫酸钠的适当组合被认定能中和高达80%的常用消毒剂。

3）方法验证的问题

环境中分离的代表菌；代表性试验表明；回收率

4）取样部位

头部、口罩、肩部、前胸、前臂、手腕、腿部/靴子、眼罩

5）限度的理解：A级＜1cfu/碟

举例：监测了4个部位（人员）（左上臂接近手腕处，右上臂接近手腕处、前胸、口罩外表面）

不合格结果：4个接触碟平均菌落数≥1cfu

2、擦拭法：采用合适尺寸的无菌模板或标尺确定擦拭的面积，无菌拭子取样后，拭子置合适的缓冲液或培养基中，充分振荡，再用适应的方法计数。是接触碟法的补充。

浸湿液：通常为无菌生理盐水或0.1%的蛋白胨溶液约5毫升

培养基：TSA

计数法：平皿涂布法、平皿浇注法、薄膜过滤贴膜法

拭子头：材料类型包括聚酯、聚氨酯、尼龙和棉

棉签头：需要灵活、耐足够长的时间，达到难以达到的地点，如管道内部。

操作：

1、浸湿拭子：开启装有约为5ml的无菌浸湿液的小试管（到带有螺旋帽的），将拭子头部浸湿，紧贴管内壁转动，挤压出多余的溶液。

2、擦拭表面：拿住拭子柄与待测物表面成30度角，缓慢并全部涂抹待测物表面三次，没涂抹一次注意翻转拭子头的方向。

3、涂抹后折断拭子头放入浸湿液试管中盖上帽，充分振荡带拭子的试管10秒，取出1ml混悬液接种到灭菌平皿中。

4、浇注灭菌TSA培养基 ，培养，计数。

注意：

1）表面微生物检测要在试验结束后进行

2）消毒剂残留物对监测的影响

3）取样位置

4）取样方式

5）方法验证问题

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