实验用试剂的配制

l．乳酸苯酚固定液  乳酸10g, 结晶苯酚10g, 甘油20g, 蒸馏水10 mL。
2. 1.6%溴甲酚紫  溴甲酚紫1.6g溶于100mL乙醇中，贮存于棕色瓶中保存备用。用作培养基指示剂时，每1000mL培养基中加入lmL 1.6%溴甲酚紫即可。
3. V.P.试剂 CuSO4 1g，蒸馏水l0mL，浓氨水40mL，10% NaOH 950mL。先将CuSO4溶于蒸馏水中，然后加浓氨水，最后加入10%NaOH。
4. 0.02%甲基红试剂  甲基红0.1g，95% 乙醇760mL，蒸馏水100mL。
5. 吲哚反应试剂 对二甲基氨基苯甲醛8g, 95%乙醇760mL，浓HCl160mL。
6. Alsever’s血细胞保存液  葡萄糖2.05g, 柠橡酸钠0.8g, NaCl 0.42g，蒸馏水l00mL。以上成分混匀后，微加温使其溶解后，用柠檬酸调节pH 6.1，分装于三角瓶中(30～50mL/瓶), 113℃湿热灭菌15min，备用。
7. Hank’s液
(l)贮存液A液：(I)NaCl 80g, KCl 4g, MgSO4•7H2O 1g，MgCl2•6H2O 1g，用双蒸馏水定容至450mL：(II)CaCl2  1.4g (或CaCl2•2H2O 1.85g) 用双蒸馏水定容至50mL。将I和II液混合，加氯仿1mL即成A液。
(2)贮存液B液：Na2HPO4•12H2O 1.52g，KH2PO4 0.6g, 酚红0.2g, 葡萄糖10g,用双蒸馏水定容至500mL，然后加氯仿1mL，酚红应先置研钵内磨细，然后按配方顺序一一溶解。
(3)应用液：取上述贮存液的A和B液各25mL，加双蒸馏水定容至450mL，113℃湿热灭菌20min。置4℃下保存。使用前用无菌的3% NaHCO3调至所需pH。
注意：药品必须全部用A.R试剂，并按配方顺序加入，用适量双蒸馏水溶解，待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品，最后补足水到总量。
(4)10%小牛血清的Hank’s液：小牛血清必须先经56℃、30min灭活后才可使用，应小瓶分装保存，长期备用。用时按10%用量加至应用液中。
8. 0.1mol/LCaCl2溶液  双蒸馏水900mL，CaCl2 11g，定容至lL，可用孔径为0.22μm的滤器过滤除菌或12l℃湿热灭菌20min。
9. 0.05mol/L CaCl2溶液  双蒸馏水900mL，CaCl2 5.5g, 定容至lL，可用孔径为0.22μm的滤器过滤除菌或12l℃湿热灭菌20min。
10. α淀粉酶活力测定试剂
(1)碘原液：称取碘11g, 碘化钾22g，加水溶解定容至500mL。
(2)标准稀碘液：取碘原液15mL，加碘化钾8g，定容至500mL。
(3 )比色稀碘液：取碘原液2mL，加碘化钾20g，定容至500mL。
(4)2%可溶性淀粉：称取干燥可溶性淀粉2g，先以少许蒸馏水混合均匀，再徐徐倾入煮沸的蒸馏水中，继续煮沸2min，待冷却后定容至100 mL(此液当天配制使用)。
(5)标准糊精液：称取分析纯糊精0.3g，用少许蒸馏水混匀后倾入400mL水中，冷却后定容至500mL，加入几滴甲苯试剂防腐，冰箱保存。
11. pH6.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
称取Na2HPO4•12H2O 45.23g，柠檬酸(C6H8O7•H20) 8.07g，加蒸馏水定容至1000mL。
12. 0.lmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)  称取Na2HPO4•12H2O 35.82g，溶于1000mL蒸馏水中，为A液：称取NaH2PO4•2H2O15.605g，溶于l000mL蒸馏水中，为B液。取A液61mL, B液39mL，可得到100mL 0.lmol/L pH7.0的磷酸缓冲液。
13．测定乳酸的试剂
(l)pH9.0缓冲液：在300mL容量瓶中加入甘氨酸11.4g, 24%NaOH 2mL，加275mL蒸馏水。
(2)NAD溶液：NAD 600mg溶于20mL蒸馏水中。
(3)L（+）LDH：加5mg L(+)LDH于lmL蒸馏水中。
(4)D(-)LDH：加2mg D(-)LDH于lmL蒸馏水中。
14. Taq缓冲液(10×)  Tris-HCl (pH8.4) 100mmol/L，KCl 500mmol/L，MgCl2 15mmol/L，BSA (牛血清清蛋白) 或明胶lmg/mL
15. dNTP混合液 dATP 50mmol/L，dCTP 50mmol/L，dGTP 50mmol/L, dTTP 50mmol/L。
16. 1%琼脂糖  琼脂糖lg, TAE100mL, 100℃融化后待凉至40℃倒胶，胶厚度约0.4～0.6。
17. TAE  Tris碱4.84mL，冰乙酸1.l4mL，0.5mol/L pH8.0的EDTA - Na2•2H2O (乙二胺四乙酸钠盐) 2mL
18. 0.5mol/L EDTA(pH8.0)  在800mL蒸馏水中加186.lg EDTA，剧烈搅拌，用NaOH调pH至8.0(约20g颗粒)，定容至lL，分装后121℃湿热灭菌备用。
19．硝酸盐还原试剂
(1)格里斯氏(Griess)试剂
A液：对氨基苯磺酸0.5g，稀醋酸(10%左右)150mL
B液：α萘胺0.1g，蒸馏水20mL, 稀醋酸(10%左右)150 mL
(2)二苯胺试剂：二苯胺0.5g溶于l00mL浓硫酸中，用20 mL蒸馏水稀释。
在培养液中滴加A、B液后溶液如变为粉红色、玫瑰红色、橙色或棕色等表示有亚硝酸盐还原，反应为阳性，如无色出现则可加1～2滴二苯胺试剂：如溶液呈蓝色则表示培养液中仍存在有硝酸盐，从而证实该菌无硝酸盐还原作用：如溶液不呈蓝色，则表示形成的亚硝酸盐已进一步还原成其他物质，故硝酸盐还原反应仍为阳性。
   
   

 

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