溶血性链球菌是需养或兼性厌氧菌,营养要求较高,普通培养基上生长不良,需补充血清、血液等生长因子。最适生长温度为37℃，最适PH为7.4-7.6，在肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀生长，在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株溶血不一。
此外，溶血性链球菌对消毒剂的抵抗力较低，远低于大肠杆菌对消毒剂的抵抗力。因此，培养时应注意尽量减小试管中的消毒剂残留对溶血性链球菌的生长的影响。
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