摘要
目前药敏试验一般采用牛津杯法,其过程繁琐,需要专用的陶瓦盖。本研究采用HB四连式牛津杯替代牛津杯进行药敏试验,其操作过程简单,可以在一次性平皿中进行试验,节省成本,其效果与牛津杯接近,可以替代牛津杯进行药敏试验。
试验方法
1、菌悬液的制备
将菌种接种于营养琼脂斜面上生长,用生理盐水将菌苔洗下,震荡混匀。
2、抗生素溶液的制备
按照《中国药典》中抗生素浓度标准配制。
3、倒平板及接种
取直径为90mm、高度为14mm的一次性平皿,注入约15mL加热融化的培养基,使其在平皿底内均匀摊布,放置在水平台面上使其凝固,作为底层。另取适量培养基加热融化后,放冷至48-50℃(芽孢可至60℃),加入适量的菌悬液(能得到清晰的抑菌圈为度),摇匀,再向平皿中注入约5mL,使在底层上均匀摊布,作为菌层(试验的关键是固体培养基表明平整),放置在水平台上冷却。
4、放置HB四连式牛津杯及添加抗生素
HB四连式牛津杯已经辐照灭菌,可以直接使用。用无菌镊子夹住HB四连式牛津杯正面的凸点(标有“海博生物”的为正面),将其放置在菌层培养基表面上,用压杯板放置在HB四连式牛津杯10秒左右,使其底部与培养基接触紧密,防止漏液。对角的2个小管分别滴入高浓度的抗生素溶液,另一对角的2个小管分别滴入低浓度的抗生素溶液。
5、培养及检定
小心平稳的将平皿在规定的条件下培养,然后测量各个抑菌圈直径,HB四连式牛津杯产生的抑菌圈直径与传统的牛津杯产生的抑菌圈直径基本一致,说明HB四连式牛津杯可以替代传统牛津杯,如下图所示。
牛津杯与HB四连式牛津杯产生的抑菌圈
结论
HB四连式牛津杯操作方便简单;试验条件简单,可以在一次性平皿中进行,不必在陶瓦盖中进行,节省成本;重复性高,稳定性好,产生的抑菌圈直径与牛津杯直径很接近。因此可以替代牛津杯来进行药敏试验。
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