荧光实验结果观察

   日常实验中，经常会遇到大肠杆菌需要观察荧光的情况。国标4789.38-2012大肠埃希氏菌计数中第二法（VRBA-MUG计数），GB/T5750.12-2006水及水源水中的大肠埃希氏菌检验，都需要观察荧光，可见荧光结果观察的重要性。

   MUG，是4-甲基伞形酮-β-D半乳糖苷的缩写，该物质为β-半乳糖苷酶与MUG结合并剪切β-半乳糖苷键，释放荧光显色团4-甲基伞形酮，在紫外光（λ=366nm）下观察，培养物发出蓝色荧光。

   观察荧光的条件：

   1）在紫外光为366nm波长；

   2）在黑暗的环境下观察，有助于更好地观察荧光；

   3）紫外灯灯管最好直接照射在待测平板或试管上，无玻璃等物品吸收紫外光；

   4）使用空白管、阳性菌、阴性菌做对照。

   5）推荐使用简易便携式荧光检测灯，不但具备以上三个要求，而且避免了紫外光对人直接照射的情况，对试验人员有所保护。

   空白产荧光原因分析：

   1）试管或平皿洗刷不干净所致，试管或平皿中残留4-甲基伞形酮，会导致空白有荧光。

   2）观察荧光的紫外灯不合适，紫外灯的波长虽为366nm，但外侧有玻璃灯罩，或者功率太大（瓦数高或灯太亮）均会影响荧光效果。

   3）试管或平皿本身原因。有些试管或平皿本身由于质量原因，在紫外灯下自身就带有光亮。使用前，可以先拿几种试管或平皿装入蒸馏水，在紫外灯下观察一下，然后挑取亮度较暗的使用。

   建议：

   建议做荧光试验时，采用阳性对照菌同时观察，可简单明了。

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