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VP试验的试验原理、操作步骤及注意事项

郝倩倩 
录入时间:2017-4-18 11:53:34 来源:青岛海博生物

一、实验原理:

某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸,丙酮酸可进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇,乙酰甲基甲醇在碱性环境下被氧化成为二乙酰,后者与蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用,生成红色的胍缩二乙酰而呈现红色,为VP试验阳性。若培养基中胍基含量少,可加入少量含胍基的化合物如肌酸肌酐等(本试验加入α萘酚)可以加速其反应。

二、试剂与器材:

1、菌种:大肠埃希氏菌、产气肠杆菌。

2、培养基:葡萄糖蛋白胨水。

3、试剂:VP试液甲液(6%α萘酚酒精溶液)和乙液(40%KOH溶液)

三、操作步骤:

Barritt法:将大肠埃希氏菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水中,35℃培养24h~48h,于培养物中先加入VP试液甲液(6%α萘酚酒精溶液)6滴,摇匀,再加入乙液(40%KOH溶液)2滴,摇匀,观察结果。

四、试验结果:

如立即于数分钟内出现红色反应者为阳性;若不出现红色反应,可将试管置35℃孵育4h后再行观察,仍无红色出现者为阴性。本试验大肠埃希氏菌为阴性、产气肠杆菌为阳性。

五、注意事项:

滴加VP试剂甲液和乙液后需摇匀,静置10min后才能看到红色化合物出现。

 

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