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四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB)原理及现象

王娟 
录入时间:2017-5-16 16:42:45 来源:青岛海博生物

用途:用于沙门氏菌选择性增菌培养(GB4789.28-2013GB4789.4-2010SN/T2206.1-2008SN0170-92ISO标准)

原理:蛋白胨和牛肉粉提供碳源、氮源和维生素,满足细菌生长的需求;氯化钠可维持均衡的渗透压;碳酸钙能中和细菌产酸及吸收有毒的代谢产物;硫代硫酸钠和四硫磺酸钠结合可抑制肠道共生菌(四硫磺酸钠是在培养基加入碘和碘化钾时形成),而具有四硫磺酸钠还原酶的细菌能在此培养基中繁殖;胆盐和煌绿可抑制大肠群菌和其它革兰氏阳性细菌。

操作步骤:

1、制备质控菌液。

2、接种

2.1混合菌的接种

在装有待测培养基的试管中接种10-100CFU的目标菌,并接种1000-5000CFU的非目标菌,接种总量1ml,同时接种两个平行管,混匀。同时分别将目标菌菌悬液(与试管接种同一稀释度)和非目标菌菌悬液(比试管接种小10-100倍稀释度)1ml倾注平板,接种两个平板,作接种量计数用,42±1℃培养18-24小时。

2.2非目标菌接种

在装有待测培养基的试管中接种1000-5000CFU的非目标菌,接种量1ml,同时接种两个平行管,混匀,42±1℃培养18-24小时。

3、培养液的接种

3.1混合菌培养液的接种

10μL接种环取1环经培养后的混合菌培养液,换线接种到XLD上,每管接种一个平板,36±1℃培养18-24小时。

3.2非目标菌培养液的接种

吸取10μL经培养后的非目标菌培养液,均匀涂布接种到TSA上,每管接种一个平板。也可使用倾注法进行接种,36±1℃培养18-24小时。

4、记录实验结果

目标菌在选择性平板上的菌落应>10CFU,则表示待测液提培养基的生长率良好;非目标菌在非选择性平板上的菌落<100CFU,则表示待测液体培养基的选择性为良好。

微生物试验:

接种以下质控菌株,在42±1℃培养18-24小时

 

 

1-2  四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB)微生物质控结果

备注:a:伤寒沙门氏菌,b: 鼠伤寒沙门氏菌,c: 大肠埃希氏菌,d:金黄色葡萄球菌,e:空白对照

方法的局限性

本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。

 

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