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明胶液化培养基的原理、应用及使用注意事项

许英俊
录入时间:2017-5-18 9:46:11 来源:青岛海博生物

一、试验原理:

   明胶液化(gelaune liquefaction)指细菌把明胶分解成液状的现象。这是因为有些细菌具有明胶酶(亦称类蛋白水解酶),能将明胶先水解为多肽,又进一步水解为氨基酸,使其失去凝胶性质,从而使半固体的明胶培养基成为流动的液体,即液化。这种能力因细菌种类不同而有显著差异,因此很早以来就被作为鉴别、测定细菌的一种特征。例如:葡萄球菌属、变形菌属、芽孢杆菌属均具有液化能力,而大肠杆菌就无这种液化能力。

   该培养基中蛋白胨和牛肉膏粉为微生物生长提供氮源、维生素、矿物质;某些含明胶酶的细菌水解明胶,使其液化而降低明胶的胶凝作用。

二、 试验方法:

   a 称取适量明胶培养基(营养明胶),加入蒸馏水或去离子水,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装试管高层,116℃高压灭菌15min,垂直放置待培养基凝固后,备用;

   b 挑取18~24h待检验培养物,以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基;

   c 于20~22℃培养7~14天。明胶高层亦可于36±1℃培养。

   d 每天观察结果,若因培养温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、将接种物放于2—8℃约10—30min待降温后取出观察,若果确实被液化,即为试验阳性;平板试验结果的观察为在培养基平板点种的菌落上滴加试剂,若为阳性,10~20min后,菌落周围应出现清晰带环。否则为阴性。

三、临床应用:

   临床上主要用于肠杆菌科细菌的鉴别,如沙雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶,而其他细菌很少液化明胶。有些厌菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外多数假单胞菌也能液化明胶。


四、注意事项: 
 (1)如有的菌在20℃不生长则在30℃培养生长后,观察时放冰箱或冷水中降温,待对照管凝固后再记录。 
 (2)灭菌过高或过低会影响结果,一般用116℃蒸汽灭菌15min较为合适。 

五、常见问题:

   问:明胶培养基放在37°培养了两天后液态了,再放到4度冰箱里又变成固态了,网上说30min后取出观察是立即观察还是要放室温呀?

   答:是立即观察。倾斜试管看看表层是否有被液化的迹象,如果有液化则表层软化出现流动状,如果不被液化则完全凝固。一般认为明胶的凝固点是24℃,不过各批次明胶差异很大,所以要放在冰箱后观察。按你说的放在4℃冰箱里又变成固态了,那就是还没有出现明胶液化。不过这个实验要培养7天的。


   问:明胶培养基放入培养箱会液化怎么回事?

   答:两种可能:(1)某些细菌可产生一种胞外酶-明胶酶,能使明胶分解为氨基酸,从而失去凝固力,半固体的明胶培养基成为流动的液体;(2)明胶的熔点较低,如果放到37°或更高的温度下,则明胶自身就容易液化,出现假阳性结果。


   问:明胶液化温度为24℃,其培养温度一般为20℃,但是为什么明胶高层可以在36℃下培养,什么是明胶高层?

   答:你所说的“明胶高层”其实并不是一个词语,应该分解为“明胶”和“高层”两个词语。意即:在营养明胶培养基的高层,或者更明确的说是上层。

   这个是明胶液化试验,是一种生理生化试验,目的在于鉴定细菌。由于有些细菌具有明胶酶(亦称类蛋白水解酶),能将明胶先水解为多肽,又进一步水解为氨基酸,失去凝胶性质而液化。

   所谓的22℃或36℃其实是同一个试验,只是接种后的培养温度不同而已。用琼脂培养物穿刺接种,然后放在22~25℃培养,每天观察记录液化时间。或者是放在36℃左右培养,每天取出,放在冰箱内30分钟后再观察结果。

   之所以有这两个温度,是怕有些菌种在22-25℃下不易生长,所以置于36℃培养。


 


   问:明胶液化实验中明胶可以用琼脂代替吗?

   答:不行。明胶和琼脂性质不同,对于这个实验,可认为是完全不同的东西。


   问:做生理生化反应,配制明胶液化培养基:蛋白胨5个、葡萄糖20g、明胶200g,加水至1L,pH7.4,121度灭菌30分钟,灭菌后水浴降温,但仍为液体,配了2次了都不凝?

   答:凝胶本质是蛋白质啊,这样长时间高温灭菌,会使明胶水解,不再凝固! 该培养基通常采用116℃灭菌15分钟。


 

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