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硫酸新霉素微生物检定法操作及注意事项

郭新娟
录入时间:2017-5-26 9:16:17 来源:青岛海博生物

新霉素概述:

新霉素是由链霉菌经发酵产生,与链霉素、卡那霉素,庆大霉素同属于氨基糖苷类抗生素。它由弗氏链霉菌产生;对革兰氏阳性和阴性菌皆有效,以大肠杆菌最敏感,对金葡菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、产气杆菌、变形杆菌及痢疾杆菌等较敏感,对绿脓杆菌较不敏感。产品主要为新霉素B和C的混合物。新霉素与卡那霉素有完全交叉抗药性,与链霉素有部分交叉抗药性。

二、效价

按新霉素(C23H48N6O13)的量计,1mg=1000ug(效价),即1000新霉素单位相当于1mg的新霉素。硫酸新霉素的理论效价单位为676单位/mg(614.65/908.90=0.676)。

三、2015版中国药典效价测定方法及注意事项

1)方法:二剂量法,底层培养基20ml、菌层5ml,剂量范围:4.0~25.0单位/ml。

2)培养基:抗生素2号培养基(pH为7.8—8.0)

3)菌种:金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003

4)灭菌缓冲液:pH7.8的磷酸盐缓冲液,内含3%氯化钠。

5)供试品的制备:由于本品极易溶解于水,故用水溶解样品,再用缓冲液稀释即可。

6)培养温度和时间:35-37℃,14-16h。

四、测定中的关键点及注意事项

1)由于氨基糖苷类抗生素硫酸盐吸湿性较强,称量时应注意快速,并在称量前1-2h更换天平内干燥剂。从冰箱干燥器取出的标准品应放置室温后称量。

2)应预实验菌量使得标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18—22mm。

3)滴加试供液至牛津杯中的滴加时间不可过长,因溶液的扩散时间会影响测定结果。

4)培养时应注意双碟的受热均匀,双碟叠放不可超过3层,避免受热不均影响抑菌圈大小。

5)由于剂量与抑菌圈直径大小的直线斜率较大,试验剂量所致抑菌圈直径较小,故对提高灵敏度和重现性不利,因此可采取以下措施:一,试验溶液滴入牛津杯后,在室温条件下先放置一段时间再置于培养箱培养,可使抑菌圈增大。亦有报道,在培养前将双碟置于冰箱放置比在常温下放置更能提高灵敏度和扩大抑菌圈。二、新霉素能与琼脂进行物理结合,加入氯化钠能使之逆转,因此在试验溶液中加入一定量的氯化钠,可以显著增加新霉素在琼脂中的扩散作用。试验表明,抑菌圈的大小随加入氯化钠的浓度增大而增大,以加入3%为宜。但在试验溶液中加入磷酸盐或在培养基中含有氯化钠等盐类,反而会使抑菌圈变小。三、提高缓冲液和培养基的pH值均能使抑菌圈直径扩大,但过高的pH值不利于细菌生长,会使抑菌圈边缘不整齐,故一般以pH7.8-8.0为宜。

6)硫酸新霉素片含量测定时,由于本品中含有对水不溶性辅料,在进行含量测定前应充分研磨混匀后才能取样。在溶解供试品时,须充分振摇提取,供试液中的辅料不必过滤除去,若采用过滤操作往往使结果偏低。

 

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