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菌种活化的操作方法!



录入时间:2017-8-14 16:43:17 来源:食品实验室服务

低温保存管中之一般菌种临时存放及活化

A. 低温保存管之临时存放及解冻中之一般菌种临时存放及活化

1. 低温保存管(cryo tube)应存放于-20℃ ~ -80℃之低温条件下。

2. 准备 37℃之 70﹪(V/V)酒精浴槽(只能在电气水浴槽中改放酒精,不可以火加温,以免危险;若以 37℃水浴取代,应避免水中微生物污染),其中事先安放小试管架(可放置 cryo tube 之大小),液面不可高达管塞。

3. 将 cryo tube 从低温保存条件中取出,置于 37℃浴槽之小试管架上。

4. 不断轻微摇动 cryo tube,液面不可高至管塞,直至结冰完全溶解(约需 2 分钟)。

B. 菌株活化: 在无菌操作下 

1. 用无菌微量吸管,从已溶解之cryo tube 吸取 1-2滴之菌液,滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近,以划线法接种于培养基。

2.将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。

C. 划线法

1. 手持金属接种环,用酒精灯将接种环(共约5公分)烧至火红,并不断来回烧烤金属固定杆之前约10公分,等待约10秒钟,将接种环前端轻触培养基边缘凝胶(无菌体部份),待接种环完全冷却后,以环沾黏菌滴,由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线,直到涵盖1/3培养基为止(I区)。 

2. 灼烧接种环,待数秒冷却后,旋转培养基自I区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域(II区)。

3. 重复2的动作完成III 区与IV 区。

4. 灼烧接种环,将接种环归位。

D. 图示

(1)金属接种环

 

(2)平板划线法

冷冻干燥管之开管说明

下列步骤请在无菌环境下操作:

 1、以沾有70%酒精的棉花,擦拭外管,在火焰上加热外管之尖端。

 2、滴数滴无菌水于加热处,使外管破裂,再以硬棒敲破尖端。

 3、取出隔热纤维纸和内管,以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。

 4、( a ) 适用于细菌  用无菌吸管,吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基,滴入内管内,并轻微震荡(可用该吸管协助),直到均匀悬浮。( b ) 适用于霉菌、酵母菌  用无菌吸管,吸取0.3-0.5 ml无菌水,滴入内管内,待干燥粉末溶解后,以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内,轻微震荡使其均匀后,静置30至60分钟。

 5、取0.1-0.2 ml之菌体悬浮液于指定的平板培养基上,做划线分离培养或做成一系列之稀释,用无菌L型玻棒均匀涂抹,以检验菌种之纯度及活化情形,而剩余的菌体则全部移入指定的液体培养基内,并依指定的温度培养之。

 6、某些菌种经过冷冻干燥保存后,迟滞期 ( lag period ) 较长,必须等培养二倍时间后才能长出,且再经过一、二次继代培养 (Subculture) 后才能正常生长。经过以上的努力后仍培养失败,才视为不能活化。

 7、若菌种未能活化,或活化之菌落有疑问时,请于收到菌种之一个月内,以问题菌株反应单传真至本中心,即进行处理。

 8.未开封之冷冻干燥管,请冷藏于4℃冰箱,切勿冷冻保存。

 

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