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细菌生化试验—石蕊牛奶试验

张辉
录入时间:2018-1-15 8:41:29 来源:青岛海博生物

一、试验原理:

    石蕊既是pH指示剂,又是氧化还原指示剂,在酸性溶液(pH 4.5)呈红色,在碱性(pH 8.3)呈蓝色,培养基本色应为紫蓝色(pH 6.8)。石蕊又可被某些细菌还原成无色母体。

牛奶含有乳糖和三种主要蛋白质,即酪蛋白、乳蛋白和乳球蛋白。

    引起牛奶凝固主要是细菌含有凝乳酶,它可使酪蛋白转化成副酪蛋白,或因乳糖发酵产生大量酸使酪蛋白沉淀所致。

    有些细菌产生脂酶,可分解牛奶中的脂肪,形成黄色透明液体。

    有些细菌具有酪蛋白水解酶,可催化酪蛋白水解,最终转化成透明液体的酪蛋白原沉淀物,这个过程称为蛋白胨化。

二、培养基

    脱脂奶粉      100.0 g

    石蕊          适量

    水            1000.0 mL

    将奶粉充分溶化于水中,调至pH 6.8,加入石蕊溶液直到呈现紫蓝色(pH 6.8),分装试管,每管约5 mL。于115℃灭菌10 min,迅速冷却,放冰箱中备用。

    石蕊溶液配制法:称取石蕊2.5 g,放入钵中研碎,移放于盛有40%乙醇水溶液50 mL的烧瓶中,煮沸1 min,静置约10 min,吸取上清液移入另一烧瓶中,再加40%乙醇水溶液50 mL于原烧瓶中,再煮沸1 min。将上清液加于前上清液中,将两次上清液混合均匀,离心沉淀,将上清液倒入100 mL量筒中,用40%乙醇补至100 mL,滴加1 M盐酸直至溶液呈现紫色,即为2.5%石蕊溶液。

    95%乙醇42.1 mL加水至100 mL即为40%乙醇溶液。

三、试验方法

    以待试菌18-24 h培养物接种,若为厌氧芽孢杆菌,应在培养基管中加入无菌铁屑或铁钉等,并加无菌凡士林等覆盖,置36±1℃培养1-14天。

四、试验结果判断:

    1. 粉红色:乳糖被发酵产酸;

    2. 紫蓝色:乳糖为被发酵,保持原色;

    3. 蓝色:碱性反应,乳糖为被发酵,细菌分解培养基中含氮物质,产生碱性物质;

    4. 白色:石蕊被还原;

    5. 澄清:牛奶蛋白被消化(胨化);

    6. 凝块会成凝乳:因大量产酸,牛奶蛋被被凝固;

    7. 产气:乳糖被分解产酸产气,强烈发酵可破坏凝块。

五、说明:

    如无脱脂奶粉,可将新鲜牛奶放冰箱过夜,除净上面的奶油层,将脱脂奶置于流动蒸汽加热灭菌1 h,冷却到小于10℃,以灭菌纱布过滤,加石蕊溶液至淡紫色为止,分装试管,灭菌同前。

 

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