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微生物检测斜面接种操作要点



录入时间:2018-3-1 15:35:37 来源:青岛海博生物

一、斜面接种

(1)在肉膏蛋白胨斜面试管上,用记号笔写上将接种的菌名、日期和接种者。 

(2)点燃酒精灯或煤气灯。

(3)将菌种试管和待接种的斜面试管,用大拇指和食指、中指、无名指握在左手中,并将中指夹在两试管之间,使斜面向上,成水平状态,。在火焰边用右手松动试管塞,以利于接种时拔出。 

(4)右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌(参照实验一),在火焰边用右手的手掌边缘和小指,小指和无名指分别夹持棉塞(或试管帽),将其取出,并迅速烧灼管口。

(5)将灭菌的接种环伸入菌种试管内,先将环接触试管内壁或未长菌的培养基,达到冷却的目的,然后再挑取少许菌苔。将接种环退出菌种试管,迅速伸入待接种的斜面试管,用环在斜面上自试管底部向上端轻轻地划直线,勿将培养基划破,也不要使环接触管壁或管口。 

(6)接种环退出斜面试管,再用火焰烧管口,并在火焰边将试管塞塞上。将接种环逐渐接近火焰,再烧灼。如果接种环上沾的菌体较多时,应先将环在火焰边烤干,然后烧灼,以免未烧死的菌种飞溅出污染环境,接种病原菌时更要注意此点。

二、液体培养基接种 

  向肉膏蛋白胨液体培养基中接种少量菌体时,其操作步骤基本与斜面接种时相同,不同之处是挑取菌体的接种环放入液体培养基后,应在液体表面处的管内壁上轻轻磨擦,使菌体从环上脱落,混进液体培养基,塞好试管塞后,摇动液体,使菌体在液体中分布均匀,或用试管振荡器混匀。

  向液体培养基中接种量大或要求定量接种时,可将无菌水或液体培养基注入菌种试管,用接种环将菌苔刮下,再将菌种悬液以无菌吸管定量吸出加入,或直接倒入液体培养基。如果菌种为液体培养物,则可用无菌吸管定量吸出加入或直接倒入液体培养基。整个接种过程都要求无菌操作。 

三、穿刺接种

  用接种针挑取菌种(针必须挺直),自培养基的中心垂直地刺入半固体培养基中,直至接近管底,但不要穿透,然后沿原穿刺线将针拔出,塞上试管塞,烧灼接种针。 

  上述几种接种法的无菌操作,凡未叙述的均按实验一操作。试验者应反复练习无菌操作接种技术,直至较熟练地掌握。

四、将已接种的斜面、液体和半固体培养基放置28—30℃温箱,培养2—3天后取出观察结果。

 

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