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亚硒酸盐增菌培养基的原理及使用注意事项

许英俊
录入时间:2018-3-20 14:51:39 来源:青岛海博生物

一、试验原理:

本培养基主要用于增殖标本中的沙门氏菌。其中,胰蛋白胨提供碳源和氮源,满足细菌生长的需求;乳糖是可发酵的糖类;亚硒酸氢钠对革兰氏阴性杆菌具有毒性,抑制不发酵乳糖的革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数革兰氏阴性肠道菌;但大肠杆菌等细菌能使乳糖发酵产酸,进而中和因亚硒酸盐被细菌还原而产生的碱。磷酸盐是缓冲剂,保持培养基PH稳定,有利肠道致病菌的生长繁殖。

二、试验结果判断:

质控菌株接种后于36±1℃培养18-24h结果如下:  

 菌 名

 菌 号

 生长状况

 培养特征

 鼠伤寒沙门氏菌

 ATCC14028

 良好

 变红,混浊

 大肠埃希氏菌

 ATCC25922

 受抑制

 澄清或微混浊

粪肠球菌

 ATCC29212

受抑制

澄清或微混浊

 

 

不同菌种在亚硒酸盐增菌液中培养的结果

三、使用方法:

1)按说明书称取适量干粉,加热溶解于1000ml蒸馏水中分装无菌试管或三角瓶备用。注无需高压灭菌。

2)污水:取200ml污水,用灭菌滤膜进行抽滤。用100ml二倍浓度SF增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱到灭菌三角瓶内,充分摇匀。

污泥:用灭菌匙取污泥20g,放入灭菌容器内,加入200ml灭菌水,充分混匀,制成110混悬液,摇匀。加100ml至装有100ml二倍浓度SF增菌液的已灭菌的三角瓶内,摇匀。

3)将已接种的三角瓶放入恒温培养箱中,36±1℃培养1824h

四、注意事项:

1)亚硒酸盐具有致畸毒性,使用时应特别注意。

2)此培养基不得高压灭菌,也不得用较长时间的流通蒸汽灭菌或较长时间的煮沸灭菌。制成的培养基应贮存于4℃冰箱。

3)此培养基中的蛋白胨品种很重要,因此无论国产或国外蛋白胨在使用前必须先作细菌学检测。国产蛋白胨必须做到每批检测。

4Oxiod手册还介绍用甘露醇代替乳糖,用于分离伤寒沙门氏菌及乙型副伤寒沙门氏菌。Hobbs等比较含乳糖和含甘露醇两组亚硒酸盐增菌培养基,在38份伤寒阳性粪便中,由含甘露醇组分离出32例阳性,而含乳糖组只有5例阳性,显示甘露醇对分离伤寒沙门氏菌有高度选择性。

5粪便标本接种量约占培养基体积的1%,或将含有粪便的棉拭子插入培养基中,尿液标本可等量加入双倍浓度增菌液中。增菌时间应根据标本污染情况而定,污染严重的增菌在18小时以内,反之可适当延长增菌时间,但不得超过24h,即转种于选择性分离培养基。因延长增菌时间可使大肠菌群迅速生长繁殖,影响沙门氏菌检出。

 

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