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几种常见的微生物酶类实验

杨永帅
录入时间:2018-3-30 13:41:16 来源:青岛海博生物

自然界中的很多微生物都具有产酶的特性,其中最常见的四种分别是过氧化氢酶、氧化酶、凝固酶和DNA酶。下面就这四种酶的检验方法做一下介绍。

1、过氧化氢酶实验

    很多细菌都可以产过氧化氢酶,过氧化氢酶能够催化过氧化氢,释放出氧气,从而产生气泡。检验方法是取3%过氧化氢溶液0.5ML,滴加于不含血液的细菌琼脂培养基上,或者取1-3ML滴加到10ML的菌悬液中。如果培养物中出现气泡则为阳性。做过氧化氢酶实验时要注意以下几点:1、细菌要新鲜。2因为红细胞中含有过氧化氢酶,可能出现假阳性,所以不能用血琼脂平板做过氧化氢酶实验。

2、氧化酶实验

    具有氧化酶的细菌,能够氧化对苯二胺,生成有色的醌类化合物。检验方法是取洁净的滤纸一小块,涂抹菌苔少许,滴加一滴10g/L对苯二胺溶液于菌落上,观察颜色变化。如果立即呈粉红色并迅速转为紫红色者为阳性。做该类实验应注意不能采用在含葡萄糖培养基上生长的菌落,因为葡萄糖发酵可抑制氧化酶的活性。

3、凝固酶实验

    金黄色葡萄球菌可产生游离的凝固酶,从而使血浆凝固。检验方法是取两支试管,分别加入0.5ML血浆(可适当稀释),挑取菌落加入到试管中,用已知的阳性菌株作为对照,37摄氏度下水浴3-4小时。血浆凝固者为阳性。

4. DNA酶实验

    某些细菌可产胞外DNA酶,DNA酶可以水解DNA长链,形成的寡核苷酸可溶于酸,当在菌落平板上加入酸后,若在菌落周围出现透明环,则表明该菌具有DNA酶。检测方法是将待检菌落点状接种于DNA琼脂平板上,35摄氏度培养18-24小时,在细菌生长物上加一层1MOL/L盐酸(使菌落浸没),如果菌落周围出现透明环则为阳性,无透明环为阴性。需注意的是革兰氏阳性菌中只有金黄色葡萄球菌可产生DNA酶,因此此方法可用来鉴定金黄色葡萄球菌。

 

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