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SPS琼脂原理和使用方法

张辉
录入时间:2018-5-4 8:13:37 来源:青岛海博生物

一、试验原理:

培养基用于产气荚膜梭菌的平板计数(GB标准)。培养中的胰酪蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子;亚硫酸钠和柠檬酸铁用于检测硫化氢的产生,产气荚膜梭菌可还原亚硫酸盐为硫化物,硫化物与铁反应生成黑色硫化铁,使菌落中心呈黑色;琼脂是培养基的凝固剂;多粘菌素B和磺胺嘧啶钠抑制非梭菌的细菌。

二、培养基配方g/L

胰酪蛋白胨

酵母浸粉

柠檬酸铁

亚硫酸钠

琼脂

pH7.0±0.125

15.0

10.0

0.5

0.5

15.0

三、试验方法:

1)加热溶解以上各组分,待冷却后调节pH7.0±0.125),分装三角瓶,121℃高压灭菌15分钟,却至50℃时,每100ml培养基加入1支多粘菌素B硫酸盐溶液(1.2mg)1支磺胺嘧啶钠溶液(12mg),混匀,倾入无菌平皿,备用。

2)采用滤膜法,取50mL的水样用孔径为0.45μm的滤膜过滤,然后将滤膜移至SPS琼脂培养基上,倒置于36℃±1℃厌氧培养24h,计数黑色菌落。

四、试验结果判断:

产气荚膜梭菌在滤膜上的单菌落呈黑色,任意挑取3个至5个在滤膜上生长的黑色菌落,分别接种FT培养基,于36±1厌氧培养18h-24h后,将培养物做确证试验,根据试验结果确证产气荚膜梭菌的存在。

 

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