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DNA酶琼脂的原理及实验现象

王娟
录入时间:2018-6-11 9:32:56 来源:青岛海博生物

  用途:用于细菌DNA酶检测。

  原理:胰蛋白胨和大豆胨提供碳源和氮源;有脱氧核糖核酸酶的细菌分解培养基中的脱氧核糖核酸(DNA),使DNA长链水解成数个单核苷酸的寡核苷酸短链;氯化钙提供阳离子作为激活剂;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。将盐酸滴在培养基表面,如DNA酶阳性,其菌落周围可以产生明显透明环,如DNA酶阴性,盐酸与完整的脱氧核糖核酸反应,可形成浑浊的沉淀;如果加入0.1%甲苯胺蓝溶液,甲苯胺蓝为指示剂,DNA酶阳性时,水解DNA部分为蔷薇色;DNA酶阴性时,甲苯胺蓝显蓝色。

  操作步骤:

  使用前,把制备好的平板放置室温10-20分钟。

  1、制备质控菌液。

  2、将质控菌液划线于平板上。

  3、36±1℃倒置培养基培养18-24小时,培养结束后滴加1N盐酸,记录实验结果。

  微生物试验:

  接种以下质控菌株,36±1℃倒置培养基培养18小时:

 质控菌株

 菌株编号

 生长情况

 其他特征 

 金黄色葡萄球菌

 ATCC25923

+++

 DNA酶阳性,菌落周围有透明环

 金黄色葡萄球菌

 ATCC6538

+++

 DNA酶阳性,菌落周围有透明环

 大肠埃希氏菌

 ATCC25922

+++

 DNA酶阴性,菌落周围无透明环

 

图1-1  DNA酶琼脂微生物质控结果

备注:a:金黄色葡萄球菌(ATCC25923);b:金黄色葡萄球菌(ATCC6538);c:大肠埃希氏菌


  方法的局限性

  本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。

 

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