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克氏双糖铁琼脂的原理及使用方法

许英俊
录入时间:2018-7-17 9:31:01 来源:青岛海博生物

一、用途和原理:

  克氏双糖铁琼脂(Kligler Iron Agar)用于鉴别肠道菌发酵葡萄糖和乳糖,及产生硫化氢的生化反应。

蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素、矿物质;乳糖、葡萄糖为可发酵糖类,其产酸时通过酚红指示剂测出,酸性呈黄色,碱性呈红色;硫代硫酸钠可被某些细菌还原为硫化氢,与铁盐生成黑色硫化铁;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。

二、使用方法:

  1、称取克氏双糖铁琼脂55g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装试管(装量宜多些),121℃高压灭菌15min,制成高层斜面,冷却后备用。

  2、挑取待检菌的新鲜培养物,穿刺接种混合克氏双糖铁琼脂斜面。接种时先在斜面划线,然后再穿刺底层。

  3、将试管放入培养箱内36±1℃培养18—24h。

  4、观察结果。观察斜面与底层的反应情况。

三、质量控制:

  配成的培养基为红色,下列菌株接种后于36±1℃培养24h结果如下:

菌名

菌号

生长情况

斜面/底部

产气

产H2S

大肠埃希氏菌

ATCC25922

良好

A/A

+

-

普通变形杆菌

CMCC49027

良好

K/A

-

+

鼠伤寒沙门氏菌

ATCC14028

良好

K/A

+

+

  注:“A”为产酸,“K”为产碱。

四、常见问题:

(1)克氏双糖铁试验时间为什么要控制在18-24h?KIA时间长了会怎样,短了会怎样?

答:时间短了细菌发酵不够充分,现象不明显。时间长了细菌发酵过度,因为KIA是利用酸碱指示剂显色的,时间长了自然会引起一些改变而影响判断,同时各种副反应也会造成很大影响。相对来说,时间稍微长一点儿影响不大,但不能长得太夸张。

(2)MIU试验,为什么大肠埃希菌培养24h之后,培养基出现了气泡?志贺菌的培养基就没有?

答:因为大肠埃希菌是产气的,而志贺菌不产气。

 

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