一、试验原理:
本培养基用于大肠杆菌的O157:H7的测定(SN/T0973-2000)。
胰蛋白胨提供碳源和氮源满足细菌生长的需求;氯化钠可维持均衡的渗透压;乳糖是大肠菌群可发酵的糖类;磷酸二氢钾和磷酸氢二钾是缓冲剂;月桂基硫酸钠可抑制非大肠菌群细菌的生长。大肠埃希氏菌含有的葡萄糖醛酸苷酶作用于4-甲基伞形酮-β- D葡萄糖醛酸苷(4-Methylumbellifery-β-D-Glucuronide简称MUG)的β糖醛酸苷键,使其水解,释放的4-甲基伞形酮 在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。97%的大肠埃希氏杆菌、10%的沙门氏菌以及少量的志贺氏菌具有葡萄糖醛酸苷酶;而致病性大肠杆菌(包括O157:H7)不具有葡萄糖醛酸苷酶,因而不会产生荧光。
二、培养基配方(g/L):
胰蛋白胨 |
20.0 |
氯化钠 |
5.0 |
乳糖 |
5.0 |
磷酸氢二钾 |
2.75 |
磷酸二氢钾 |
2.75 |
月桂基硫酸钠 |
0.1 |
pH 6.8±0.2 25℃ |
三、操作步骤:
1、制备质控菌液。
2、把质控菌液加入试管中。
3、在36±1℃培养24小时,记录实验结果。
四、微生物试验结果:
接种以下质控菌株,在36±1℃培养18-24小时:
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
生长情况 |
其他特征 |
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
>5000 |
+++ |
产气,有荧光 |
大肠埃希氏菌0157 |
ATCC35150 |
>5000 |
+++ |
产气,无荧光 |
伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
>5000 |
+++ |
不产气,无荧光 |
金黄色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
>5000 |
+++ |
抑制 |
图1-2 月桂基硫酸盐蛋白胨MUG培养基微生物质控结果
备注:A:正常情况下拍摄,B:366nm紫外灯下拍摄;
a:大肠埃希氏菌O157,b: 大肠埃希氏菌,c: 伤寒沙门氏菌,d:金黄色葡萄球菌,e:空白对照
五、方法的局限性
本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。
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