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赖氨酸脱羧酶肉汤的实验原理及方法

杨永帅
录入时间:2018-12-4 16:03:00 来源:青岛海博生物

一、实验原理:

  用于细菌生化试验。其中蛋白胨、酵母粉提供氮源,葡萄糖提供碳源,溴甲酚紫作为酸碱指示剂,L-赖氨酸作为反应底物。具有氨基酸脱羧酶的细菌,能分解氨基酸使其脱羧生成胺(赖氨酸→尸胺)和二氧化碳,使溶液为碱性,溴甲酚紫保持紫色。如果不脱羧,肠杆菌科的细菌能分解葡萄糖,产酸,溴甲酚紫变为黄色。氨基酸脱羧的对照管为葡萄糖发酵管,不含氨基酸,由于实验结果阳性的为保持紫色不变,阴性结果为黄色,为保证结果的可靠性,须同时接种对照管,如对照管变为黄色,说明细菌接种成功,证实试验管紫色(不变色)为阳性,而非未接种好细菌。此外,由于氨基酸脱羧的产物为尸胺、腐胺等,遇氧不稳定,故各管接种完细菌后,需加入几滴液体石蜡隔绝空气,保持胺的稳定性.

二、试验方法:

  将标准储备菌株接种到非选择性肉汤中或采用其他制备方法,制备成5 McFarland浊度(约109CFU/ml)的菌悬液。吸取0.05ml-0.08ml(约1-2滴)至生化管中,以灭菌液体石蜡覆盖  培养基表面,36±1℃培养24±2h后,观察实验结果。

三、结果判定:

质控菌株

菌株编号

生长情况

其他特征

鼠伤寒沙门氏菌

ATCC14028

良好

阳性,培养基呈紫色

大肠埃希氏菌

ATCC25922

良好

阳性,培养基呈紫色

阪崎肠杆菌

ATCC29004

良好

阳性,培养基呈紫色

福氏志贺氏菌

ATCC12022

良好

阴性,培养基呈黄色

宋内志贺氏菌

CMCC(B)51592

良好

阴性,培养基呈黄色

普通变形杆菌

CMCC(B)49027

良好

阴性,培养基呈黄色

 

 图1-1  赖氨酸脱羧酶肉汤微生物质控结果

a. 福氏志贺氏菌  b.鼠伤寒沙门氏菌  c.普通变形杆菌  d.宋内志贺氏菌  e.大肠埃希氏菌  f.阪崎肠杆菌


 

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