一、实验原理:
用于细菌生化试验。其中蛋白胨、酵母粉提供氮源,葡萄糖提供碳源,溴甲酚紫作为酸碱指示剂,L-赖氨酸作为反应底物。具有氨基酸脱羧酶的细菌,能分解氨基酸使其脱羧生成胺(赖氨酸→尸胺)和二氧化碳,使溶液为碱性,溴甲酚紫保持紫色。如果不脱羧,肠杆菌科的细菌能分解葡萄糖,产酸,溴甲酚紫变为黄色。氨基酸脱羧的对照管为葡萄糖发酵管,不含氨基酸,由于实验结果阳性的为保持紫色不变,阴性结果为黄色,为保证结果的可靠性,须同时接种对照管,如对照管变为黄色,说明细菌接种成功,证实试验管紫色(不变色)为阳性,而非未接种好细菌。此外,由于氨基酸脱羧的产物为尸胺、腐胺等,遇氧不稳定,故各管接种完细菌后,需加入几滴液体石蜡隔绝空气,保持胺的稳定性.
二、试验方法:
将标准储备菌株接种到非选择性肉汤中或采用其他制备方法,制备成5 McFarland浊度(约109CFU/ml)的菌悬液。吸取0.05ml-0.08ml(约1-2滴)至生化管中,以灭菌液体石蜡覆盖 培养基表面,36±1℃培养24±2h后,观察实验结果。
三、结果判定:
质控菌株 |
菌株编号 |
生长情况 |
其他特征 |
鼠伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
良好 |
阳性,培养基呈紫色 |
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
良好 |
阳性,培养基呈紫色 |
阪崎肠杆菌 |
ATCC29004 |
良好 |
阳性,培养基呈紫色 |
福氏志贺氏菌 |
ATCC12022 |
良好 |
阴性,培养基呈黄色 |
宋内志贺氏菌 |
CMCC(B)51592 |
良好 |
阴性,培养基呈黄色 |
普通变形杆菌 |
CMCC(B)49027 |
良好 |
阴性,培养基呈黄色 |
图1-1 赖氨酸脱羧酶肉汤微生物质控结果
a. 福氏志贺氏菌 b.鼠伤寒沙门氏菌 c.普通变形杆菌 d.宋内志贺氏菌 e.大肠埃希氏菌 f.阪崎肠杆菌
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