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肠道菌计数琼脂(VRBDA)原理和使用方法

李令梅
录入时间:2019-1-16 15:22:35 来源:青岛海博生物

一、试验原理:

  用于肠道菌计数和肠杆菌科鉴别。

  蛋白胨和酵母粉提供碳氮源和微量元素;葡萄糖是可发酵的糖类;氯化钠维持均衡的渗透压;胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌,特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌;中性红为pH指示剂,琼脂是培养基的凝固剂。

二、培养基配方(g/L):

  酵母粉

3.0

  蛋白胨

7.0

  氯化钠

5.0

  葡萄糖

10.0

  胆盐

1.5

  结晶紫

0.002

  中性红

0.03

  琼脂

13.0

  pH 7.3±0.2 25℃

三、试验方法:

  粉体装培养基的使用:

  1.称取本品39.5g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,煮沸不要超过2分钟,冷却至50℃左右时,倾入无菌平皿。无需高压灭菌。

  2.使用前,把制备好的平板放置室温10-20分钟。

  3.制备质控菌液。

  4. 选择合适稀释度的目标菌质控菌液0.1ml,均匀涂布于待测平板以及参比平板上,每一稀释度接种两个平板。

  5.用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环,将接种环接触容器边缘3次去除多余液体,在平板表面划六条平行直线,同时接种两个平板。

  6. 36±1℃倒置培养基培养18-24小时,记录实验结果。

四、结果观察与解释 

接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养18-24小时。

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

参比或计数培养基

方法

质控评定标准

其他特征

粪肠球菌 

ATCC29212

/

/

半定量

G≤5

/

大肠埃希氏菌

ATCC8739

20-200

TSA

定量

PR≥0.7

红色菌落,有胆盐沉淀环

鼠伤寒沙门氏菌

ATCC14028

20-200

PR≥0.7

红色菌落,有胆盐沉淀环

福氏志贺氏菌

CMCC(B)51572

20-200

PR≥0.7

红色菌落,有胆盐沉淀环

 

图1-2  肠道菌计数琼脂(VRBDA)微生物质控结果

备注:a:粪肠球菌,b:大肠埃希氏菌,c:鼠伤寒沙门氏菌,d:福氏志贺氏菌

五、注意事项

本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。

 

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